【摘 要】
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目的应用CRISPR/Cas9系统建立B4GalT7基因敲除的Huh-7.5细胞株,进而验证其对丙型肝炎病毒(HCV)感染的影响。方法针对人源B4GalT7基因设计3个不同的sgRNA,构建同时表达Cas9和s
【机 构】
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北京大学医学部基础医学院病原生物学系,
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目的应用CRISPR/Cas9系统建立B4GalT7基因敲除的Huh-7.5细胞株,进而验证其对丙型肝炎病毒(HCV)感染的影响。方法针对人源B4GalT7基因设计3个不同的sgRNA,构建同时表达Cas9和sgRNA的慢病毒转移质粒,制备重组慢病毒并转导Huh-7.5细胞,用嘌呤霉素筛选细胞克隆,提取细胞克隆的基因组DNA,对sgRNA靶点附近的DNA片段进行PCR扩增,纯化PCR产物测序分析鉴定,并用Western blot进一步验证B4GalT7蛋白表达情况。成功建立基因敲除细胞株后,比较其与野生型Huh-7.5细胞株对HCV的易感性。结果成功建立了B4GalT7基因敲除的Huh-7.5细胞株,证明HCV对该细胞株的感染能力明显低于野生型Huh-7.5细胞株。结论 B4GalT7基因敲除可显著减弱HCV对细胞的感染。
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