【摘 要】
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提取巨型艾美球虫（Eimeria maxima）南通株（NT株）配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。结果表明,克隆的基因全长为1791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%。根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域
【基金项目】
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江苏省自然科学基金资助项目（B2007079）；
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提取巨型艾美球虫（Eimeria maxima）南通株（NT株）配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。结果表明,克隆的基因全长为1791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%。根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域,命名为gam82-Y,进行原核表达。重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,相对分子质量约为53000。可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在。以E.maxima高免血清为一抗进行Western-blot检测,显示重组抗原gam82-Y具有免疫原性。
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