【摘 要】
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目的构建电压门控钾通道Kv1.5分子的反义核酸(Kv1.5AS)的真核表达载体,建立Kv1.5AS转染的胃癌SGC7901细胞亚系,探讨Kv1.5分子对胃癌细胞生长的抑制作用.方法通过DNA重组技术,
【机 构】
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710032,西安,第四军医大学西京医院
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目的构建电压门控钾通道Kv1.5分子的反义核酸(Kv1.5AS)的真核表达载体,建立Kv1.5AS转染的胃癌SGC7901细胞亚系,探讨Kv1.5分子对胃癌细胞生长的抑制作用.方法通过DNA重组技术,将Kv1.5全长cDNA片段从pBK-Kv1.5载体反向亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建表达Kv1.5反义核酸的重组载体pcDNA3.1-Kv1.5AS.借助脂质体将pcDNA3.1-Kv1.5AS转导入胃癌细胞SGC7901.通过MTT实验绘制细胞生长曲线,肿瘤细胞集落形成实验检测集落形成率,流式细胞仪进行细胞周期分析,并利用Western blot检测Kv1.5和Cyclin D1蛋白在基因转染细胞中的表达.结果限制性酶切鉴定结果提示,重组载体pcDNA3.1-Kv1.5AS构建成功.Western blot结果表明,转染pcDNA3.1-Kv1.5AS后,Kv1.5蛋白在SGC7901细胞中的表达显著降低.与转染空载体的对照细胞相比,转染Kv1.5AS表达载体后,SGC7901细胞生长变缓,集落形成率显著降低,细胞发生了G1期阻滞.Western blot结果证实,Cyclin D1蛋白在Kv1.5AS转染细胞中表达降低.结论电压门控钾通道Kv1.5反义核酸可抑制胃癌细胞SGC7901的生长.
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