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目的:构建siRNA的DNA稳定表达载体,为研究RNAi在哺乳动物内持续、稳定抑制靶基因表达奠定基础.方法:合成含靶向hTERT基因的siRNA转录模板的发夹结构,将载体质粒pGenesil-1用BamH1+HindⅢ进行双酶切后,T4DNA连接酶连接成重组质粒,转染到肝癌SMMC-7721细胞中进行稳定筛选、表达,检测稳定筛选前后hTERT基因表达变化.结果:重组质粒在大肠杆菌菌株JM109内扩增.提纯、纯化后用HindⅢ、EcoRI酶切鉴定及测序鉴定证明hTERT-siRNA转录模板完整、正确的插入到