【摘 要】
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目的通过体外研究探讨缺氧诱导因子(HIF)1α与2α在人脑胶质瘤细胞增殖和化疗抵抗中的协同调控作用。方法原代组织取自于陆军军医大学第一附属医院神经外科手术切除的肿瘤标本，术后经病理学证实为胶质母细胞瘤。采用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织HIF1α和HIF2α的表达；常氧或缺氧培养原代细胞72 h后，采用免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法检测HIF1α和HIF2α的表达；采用Crispr/Cas9技术敲
【机 构】
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陆军军医大学第一附属医院神经外科，全军神经外科研究所，重庆 400038,陆军军医大学第一附属医院神经外科，全军神经外科研究所，重庆 400038,中国科学院大学重庆医院神经外科 401147,中国科
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目的通过体外研究探讨缺氧诱导因子(HIF)1α与2α在人脑胶质瘤细胞增殖和化疗抵抗中的协同调控作用。
方法原代组织取自于陆军军医大学第一附属医院神经外科手术切除的肿瘤标本，术后经病理学证实为胶质母细胞瘤。采用免疫组织化学染色方法检测肿瘤组织HIF1α和HIF2α的表达；常氧或缺氧培养原代细胞72 h后，采用免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法检测HIF1α和HIF2α的表达；采用Crispr/Cas9技术敲除细胞中HIF1α、HIF2α的表达，并将细胞分为HIF1α敲除组、HIF2α敲除组、HIF1α+HIF2α敲除组及转染空白质粒对照组(以下简称对照组)。缺氧培养各组细胞72 h后，采用CCK-8法检测细胞增殖，采用流式细胞术检测细胞周期；添加替莫唑胺后继续缺氧培养各组细胞72 h后，检测细胞增殖和凋亡。
结果免疫组织化学染色结果显示，人脑胶质瘤组织高表达HIF1α和HIF2α；免疫荧光染色和蛋白免疫印迹实验均证实，胶质瘤细胞常氧培养72 h后，HIF1α和HIF2α均不表达；缺氧培养72 h后，HIF1α和HIF2α均高表达。成功敲除HIF1α、HIF2α表达后缺氧培养各组细胞72 h，CCK-8检测结果提示，HIF1α+HIF2α敲除组的细胞增殖率高于对照组、HIF1α敲除组及HIF2α敲除组(F＝24.419，P<0.001)；HIF1α敲除组、HIF2α敲除组与对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。细胞周期检测显示，HIF1α+HIF2α敲除组的G0/G1期细胞比例低于对照组、HIF1α敲除组及HIF2α敲除组，G2/M+S期细胞比例高于对照组、HIF1α敲除组及HIF2α敲除组(F＝5.326，P＝0.025)；HIF1α敲除组、HIF2α敲除组的细胞周期与对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)；添加替莫唑胺缺氧培养细胞72 h后，HIF1α+HIF2α敲除组的细胞增殖率低于对照组、HIF1α敲除组及HIF2α敲除组(F＝46.518，P<0.001)，HIF1α敲除组和HIF2α敲除组的细胞增殖率均低于对照组(均P<0.05)。
结论HIF1α与HIF2α在人脑胶质瘤细胞增殖和化疗抵抗中起协同调控作用。
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