【摘 要】
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目的研究ZNF331过表达对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法构建ZNF331过表达的慢病毒载体Flag-p LV-Neo-ZNF331,并进行包装,感染HCT116/p53+/+(p
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生命组学研究所; 潍坊医学院山东省高校生物药物重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81572578,81541093);山东省自然科学基金项目(ZR2015HM028,ZR2015HL075)
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目的研究ZNF331过表达对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法构建ZNF331过表达的慢病毒载体Flag-p LV-Neo-ZNF331,并进行包装,感染HCT116/p53+/+(p53野生型)和HCT116/p53-/-(p53缺陷型)细胞,通过Western印迹法鉴定建立ZNF331稳定过表达的细胞株。分别通过细胞增殖实验、集落形成实验、DAPI染色、流式细胞仪分析ZNF331对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响。通过免疫沉淀实验、报告基因实验和实时(real-time)PCR检测ZNF331与p53相互作用、对p53转录活性和p53凋亡相关靶基因表达的影响。结果成功构建ZNF331过表达的慢病毒载体;建立ZNF331稳定过表达的HCT116细胞克隆;ZNF331对HCT116/p53+/+细胞增殖无明显影响,但能抑制HCT116/p53-/-细胞增殖(P<0.01);ZNF331与p53存在相互作用,与空载对照细胞相比,ZNF331能梯度抑制p53转录活性,且能抑制p53凋亡相关靶基因Puma和p53AIP1的mRNA表达水平(P<0.05);ZNF331能抑制p53诱导的细胞凋亡(P<0.01)。结论 ZNF331过表达对结肠癌细胞增殖的影响依赖p53状态;且能通过与p53相互作用,抑制p53转录活性而抑制结肠癌细胞凋亡。
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