【摘 要】
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目的 以全血为起始模板直接进行PCR多重扩增,建立一种快速、简便的Y染色体微缺失检测方法.方法 用作者自行研制的"HpH-Buffer",以不经基因组DNA提取的抗凝全血为模板直接进行多重PCR扩增.分别在5管中检测无精症因子(azoospermia factor,AZF)区域的a区、b区和c区共12个序列标签位点(sequence tagged sites,SIS).为保证方法有效性,加做Y染色
【机 构】
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目的 以全血为起始模板直接进行PCR多重扩增,建立一种快速、简便的Y染色体微缺失检测方法.方法 用作者自行研制的"HpH-Buffer",以不经基因组DNA提取的抗凝全血为模板直接进行多重PCR扩增.分别在5管中检测无精症因子(azoospermia factor,AZF)区域的a区、b区和c区共12个序列标签位点(sequence tagged sites,SIS).为保证方法有效性,加做Y染色体性别决定区(sex-determining region Y,SRY)和X/Y连锁锌指蛋白基因(X-linked or Y-linked zinc finger gene,ZFX/Y)作为内控.同时,为考察方法的准确性,对每例血液样本提取基因组DNA平行实验.结果 共检测了156例男性血液样本,每组实验均加做阳性对照(正常已生育男性样本)和阴性对照(正常女性样本),以保证实验有效性.结果表明,156例样本中有144例无缺失,AZFa区缺失1例,AZFb区缺失1例,AZFc区缺失7例,AZFb和AZFc区缺失1例,AZFa、AZFb和AZFc区全缺失2例.以全血为模板和以基因组DNA为模板进行扩增所得到的实验结果完全一致.结论 所建立的方法省略了DNA提取这一繁琐的步骤,减少了PCR实验过程中可能出现的污染,缩短了操作时间,节约了实验成本.可在2小时内完成所有检测过程,有效地提高了临床检测效率."HpH-Buffer"的试剂成本很低,全部检测成本与普通PER扩增基本相同。
其他文献
目的 探讨白细胞介素-18(interleukin 18,IL-18)基因单核苷酸多态性与广西壮族系统性红斑狼疮(systematic lupus erythematosus,SLE)易感性之间的关系.方法 以115例SLE患者和160名健康对照者为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和DNA测序的方法对IL-18基因-137G/C、-607C/A单核苷酸多态性进行基因分型.结果 IL
先证者(Ⅲ13) 男,52岁.40岁时逐渐出现进行性双下肢僵硬无力,活动不灵,步行缓慢,近5-6年加重,需扶墙行走,体力劳动能力基本丧失.近1年感双下肢、骶尾部皮肤火辣感。
患儿 男,出生5天,因肺炎、病理性黄疸、气促入院.患儿为第2孕第2产,胎龄40周,足月刨宫产,出生时体重约3.0kg,出生约6 h后出现气促,出生后3天开始人工混合喂养。
先证者(Ⅴ1) 男,6岁.患儿足月顺产,出生后哭声相对较弱,四肢活动少,于2岁时会走路,4岁时开始行走时容易跌倒,上楼和下蹲后起立困难,行走如鸭子摆步,逐渐加重.查体:体温36.1℃,脉搏100 次/min,体重26 kg,患儿营养发育正常,智力发育正常,四肢肌力Ⅳ度,腱反射减弱,四肢近端肌群肌张力低,轻度肌萎缩;腓肠肌坚实肥大,Gower征阳性,翼状肩。
患者 女,30岁.因结婚5年未孕及月经失调多年就诊.查体:身高162 cm,体重55 kg.五官端正,智力正常.双乳房发育差,乳距宽.腋毛及阴毛稀少.双肘外翻.B超显示:子宫34 mm×32 mm×23 mm,左右附件分别为22 mm×12 mm×6 mm及24 mm×12 mm×7 mm.月经史:183/90,量少。
家系1丈夫24岁,妻子25岁,因两次自然流产前来遗传咨询.第1次自然流产于孕80天,第2次自然流产发生于孕40天,否认有毒物接触史,否认近亲婚配,其它检查无特殊。
患者女,74岁,因上消化道出血、贫血10天来院就诊.查体:面黄、贫血貌,皮肤巩膜轻度黄染;浅表淋巴结无肿大;心肺未见异常;腹软,肝脏触诊较韧、脾肋下可触及;双手轻微震颤,双膝反射正常。
为了解绍兴地区10年来育龄夫妻生育异常的变化及不同的生育异常与染色体异常的关系,我们对1996年1月至2006年12月来我院进行遗传咨询的生育异常患者2120例进行了回顾性分析,现报告如下。
患者 男,25岁.结婚1年其妻未孕,其妻表型正常,患者无药物及毒物接触史,表型智力正常.患者外生殖器发育偏小,双侧睾丸容积均约8 mL,身高168 cm,体重60 kg,乳腺有发育。