论文部分内容阅读
（广西康华药业有限责任公司，广西 南宁 530003）
【摘 要】目的：建立高效液相色谱法测定慈航颗粒中盐酸水苏碱的含量。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（5μm，4.6 mm×250 mm），乙腈-水（70∶30）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为200nm。结果：盐酸水苏碱在50.24～502.40μg/mL范围内线性关系良好，r=0.999 2，平均回收率为98.37%，RSD=0.52%。结论：该法简便、快速、专属性好，结果准确、可靠。
【关键词】慈航片；鹽酸水苏碱；高效液相色谱法
【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2016）04-0079-03
慈航颗粒为部颁中成药地方标准上升国家标准品种“慈航片”的升级换代品种，由益母草、当归、川芎组成，具有逐瘀生新的功效。临床上用于妇女经血不调，瘤瘕痞块，产后血晕，恶露不尽。方中君药为益母草，性味辛苦凉，入心、肝、膀胱经。具有活血、祛瘀、调经、消水的功效。治月经不调，胎漏难产，胞衣不下，产后血晕，淤血腹痛，崩中漏下，尿血，泻血，痈肿疮疡。它具有促进子宫兴奋和抗血小板聚集、改善冠脉循环、保护心脏、增强心血管的收缩、让呼吸中枢兴奋的药理作用。它的主要有效成分为盐酸水苏碱[1]。臣药当归，性温，味甘辛。归心、肝、脾经。补血和血，调经止痛，润燥滑肠。治月经不调，经闭腹痛，症瘕结聚，崩漏；血虚头痛，眩晕，痿痹；肠燥便难，赤痢后重；痈疽疮窃，跌扑损伤。臣药川芎，辛，温。归肝、胆、心包经。活血行气，祛风止痛。用于胸痹心痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，月经不调，经闭痛经，癥瘕腹痛，头痛，风湿痹痛。目前，慈航片的含量测定方法是检测阿魏酸的含量，因当归和川芎均含有阿魏酸[2-3]，专属性差，所以不能有效地排除相互干扰。本文改用高效液相色谱法测定君药益母草中盐酸水苏碱的含量，可提高专属性和结果的准确性，能够有效地控制成品质量。
1 仪器与试药
安捷伦1260型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱，5μm，4.6 mm×250 mm。
盐酸水苏碱对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号：110712-200508），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷化键和硅胶为填料；以乙腈-水（70∶30）为流动相；检测波长为200 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为室温。
2.2 测定方法
精密称取盐酸水苏碱对照品适量，用甲醇溶解并稀释成约含盐酸水苏碱0.2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；另取慈航颗粒，捻碎混匀，精密称取约10 g，置50 mL容量瓶中，加入适量甲醇摇匀，超声处理30 min，取出，定容，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液；另取慈航空白样品颗粒（缺益母草），捻碎混匀，精密称取约10 g，置50 mL容量瓶中，加入适量甲醇摇匀，超声处理30 min，取出，定容，摇匀，滤过，续滤液作为空白溶液。取3种溶液各10μL，用外标法以主峰面积定量。
2.2.1 提取方法的选择
考察超声处理和过氧化铝-活性炭洗脱两种提取方法，具体如下。
（1）超声处理：取本品，捻碎混匀，精密称取约10 g，置50 mL容量瓶中，加入适量甲醇摇匀，超声处理30 min，取出，定容，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。
（2）过氧化铝-活性炭洗脱：取本品，捻碎混匀，精密称取约10 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，称定重量，超声（250 W，40 kHz）处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，过氧化铝-活性炭柱（碱性氧化铝5 g，湿法装柱，上覆层析用40～60目活性炭2 g，甲醇预洗），收集甲醇洗脱液100 mL，蒸干，残渣用流动相定容于10 mL量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
结果：采用超声处理方式得到供试品含量为1.05 mg/g，采用过氧化铝-活性炭洗脱提取方式得到供试品含量为1.03 mg/g，相差0.02 mg，差别很小，考虑到超声处理方法相对简便，故本法采用超声提取方法。
2.2.2 提取（超声）时间的选择
本试验分别对提取时间15 min、30 min、45 min进行考察，结果提取时间分别为15 min、30 min、45 min时，样品含量分别为0.92 mg/mL、1.03 mg/mL、1.04 mg/mL，提取时间为15 min时，盐酸水苏碱的含量最小，而提取时间为30 min和45 min时，其盐酸水苏碱含量相差不大，相对标准差为0.68%。为缩短检验时间、提高劳动效率考虑，最终确定提取时间为30 min。
2.3 色谱效果
在上述色谱条件下，各取以上3种溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图如图1所示。
2.4 线性关系
精密称取盐酸水苏碱对照品25.12 mg，放置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。分别精密吸取以上对照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分别放置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以对照品含量为纵坐标，峰面积积分值为横坐标绘制标准曲线，则回归方程为Y=8.1958X+29.356，r=0.999 2，表明盐酸水苏碱在50.24～502.40μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验
取对照品溶液重复进样5次，每次10 μL，测得盐酸水苏碱的峰面积的RSD为0.46%。 2.6 重复性实验
对同一批慈航颗粒（批号131003），按正文拟订的方法平行测定6份，结果盐酸水苏碱含量的平均值为1.05 mg/g（RSD=0.42%，n=6），结果表明，本法的重复性较好。
2.7 稳定性实验
取同一供试品溶液（批号131003）在室温下立即测定，放置4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h重新测定，结果峰面积测得值分别为1 567 089、1 598 012、
1 570 234、1 589 012、1 560 132、1 584 121、
1 562 131，平均值为1 575 189，RSD为0.86%，峰面积基本一致，表明样品溶液在24 h内稳定。
2.8 回收率实验
称取已知含量的慈航颗粒约10 g，共9份，精密称定，放置于50 mL量瓶中，加甲醇适量，另分别精密量取盐酸水苏碱对照品溶液（含量为0.202 mg/mL）10 mL、10 mL、10 mL、15 mL、15 mL、15 mL、20 mL、20 mL、20 mL，分别加入以上量瓶中，超声30 min，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，制成3个不同浓度的供试品溶液各3份；分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录峰面积。按外标法计算回收率分别为98.36%、99.03%、98.99%、98.87%、98.84%、97.53%、98.35%、97.55%、98.21%，平均回收率为98.37%，RSD为0.52%。
2.9 样品测定
精密称取盐酸水苏碱对照品适量，用甲醇溶解并稀释成约含盐酸水苏碱0.202 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；另取慈航颗粒适量，捻碎混匀，精密称取10 g，放置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇，摇匀，超声30 min，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。取2种溶液各10μL，用外标法以主峰面积定量（见表1）。
3 讨论
3.1 溶剂的选择
盐酸水苏碱易溶于水和醇，因此采用甲醇溶解。
3.2 波长的选择
在500～190 nm波长范围进行扫描，结果显示，盐酸水苏碱对照品溶液在200 nm波长处有最大吸收，故本法选200 nm为紫外检测波长。
3.3 结论
本文建立的高效液相色谱法测定慈航颗粒中盐酸水苏碱的含量，结果较为准确，且简便、快速、专属性强、可靠。
参 考 文 献
[1]万斯斯，黄琳琅.益母草及其成方制剂中盐酸水苏碱含量测定方法[J].中国现代药物应用，2010（19）：107-108.
[2]康军.当归化学成分及其药理作用研究进展[J].中医中药，2005（23）：120.
[3]周江.川芎有效成分及其药理作用研究概况[J].浙江中医杂志，2007（10）：615-616.
[责任编辑：陈泽琦]
【作者简介】唐新，男，广西南寧人，广西康华药业有限责任公司执业药师，研究方向：新药的研究及推广；钟彩娜，女，广西南宁人，广西康华药业有限责任公司执业药师，研究方向：新药的研究及推广。
【摘 要】目的：建立高效液相色谱法测定慈航颗粒中盐酸水苏碱的含量。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（5μm，4.6 mm×250 mm），乙腈-水（70∶30）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为200nm。结果：盐酸水苏碱在50.24～502.40μg/mL范围内线性关系良好，r=0.999 2，平均回收率为98.37%，RSD=0.52%。结论：该法简便、快速、专属性好，结果准确、可靠。
【关键词】慈航片；鹽酸水苏碱；高效液相色谱法
【中图分类号】R286 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0688（2016）04-0079-03
慈航颗粒为部颁中成药地方标准上升国家标准品种“慈航片”的升级换代品种，由益母草、当归、川芎组成，具有逐瘀生新的功效。临床上用于妇女经血不调，瘤瘕痞块，产后血晕，恶露不尽。方中君药为益母草，性味辛苦凉，入心、肝、膀胱经。具有活血、祛瘀、调经、消水的功效。治月经不调，胎漏难产，胞衣不下，产后血晕，淤血腹痛，崩中漏下，尿血，泻血，痈肿疮疡。它具有促进子宫兴奋和抗血小板聚集、改善冠脉循环、保护心脏、增强心血管的收缩、让呼吸中枢兴奋的药理作用。它的主要有效成分为盐酸水苏碱[1]。臣药当归，性温，味甘辛。归心、肝、脾经。补血和血，调经止痛，润燥滑肠。治月经不调，经闭腹痛，症瘕结聚，崩漏；血虚头痛，眩晕，痿痹；肠燥便难，赤痢后重；痈疽疮窃，跌扑损伤。臣药川芎，辛，温。归肝、胆、心包经。活血行气，祛风止痛。用于胸痹心痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，月经不调，经闭痛经，癥瘕腹痛，头痛，风湿痹痛。目前，慈航片的含量测定方法是检测阿魏酸的含量，因当归和川芎均含有阿魏酸[2-3]，专属性差，所以不能有效地排除相互干扰。本文改用高效液相色谱法测定君药益母草中盐酸水苏碱的含量，可提高专属性和结果的准确性，能够有效地控制成品质量。
1 仪器与试药
安捷伦1260型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱，5μm，4.6 mm×250 mm。
盐酸水苏碱对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号：110712-200508），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷化键和硅胶为填料；以乙腈-水（70∶30）为流动相；检测波长为200 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为室温。
2.2 测定方法
精密称取盐酸水苏碱对照品适量，用甲醇溶解并稀释成约含盐酸水苏碱0.2 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；另取慈航颗粒，捻碎混匀，精密称取约10 g，置50 mL容量瓶中，加入适量甲醇摇匀，超声处理30 min，取出，定容，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液；另取慈航空白样品颗粒（缺益母草），捻碎混匀，精密称取约10 g，置50 mL容量瓶中，加入适量甲醇摇匀，超声处理30 min，取出，定容，摇匀，滤过，续滤液作为空白溶液。取3种溶液各10μL，用外标法以主峰面积定量。
2.2.1 提取方法的选择
考察超声处理和过氧化铝-活性炭洗脱两种提取方法，具体如下。
（1）超声处理：取本品，捻碎混匀，精密称取约10 g，置50 mL容量瓶中，加入适量甲醇摇匀，超声处理30 min，取出，定容，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。
（2）过氧化铝-活性炭洗脱：取本品，捻碎混匀，精密称取约10 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，称定重量，超声（250 W，40 kHz）处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 mL，过氧化铝-活性炭柱（碱性氧化铝5 g，湿法装柱，上覆层析用40～60目活性炭2 g，甲醇预洗），收集甲醇洗脱液100 mL，蒸干，残渣用流动相定容于10 mL量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
结果：采用超声处理方式得到供试品含量为1.05 mg/g，采用过氧化铝-活性炭洗脱提取方式得到供试品含量为1.03 mg/g，相差0.02 mg，差别很小，考虑到超声处理方法相对简便，故本法采用超声提取方法。
2.2.2 提取（超声）时间的选择
本试验分别对提取时间15 min、30 min、45 min进行考察，结果提取时间分别为15 min、30 min、45 min时，样品含量分别为0.92 mg/mL、1.03 mg/mL、1.04 mg/mL，提取时间为15 min时，盐酸水苏碱的含量最小，而提取时间为30 min和45 min时，其盐酸水苏碱含量相差不大，相对标准差为0.68%。为缩短检验时间、提高劳动效率考虑，最终确定提取时间为30 min。
2.3 色谱效果
在上述色谱条件下，各取以上3种溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱图如图1所示。
2.4 线性关系
精密称取盐酸水苏碱对照品25.12 mg，放置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。分别精密吸取以上对照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分别放置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样测定。以对照品含量为纵坐标，峰面积积分值为横坐标绘制标准曲线，则回归方程为Y=8.1958X+29.356，r=0.999 2，表明盐酸水苏碱在50.24～502.40μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验
取对照品溶液重复进样5次，每次10 μL，测得盐酸水苏碱的峰面积的RSD为0.46%。 2.6 重复性实验
对同一批慈航颗粒（批号131003），按正文拟订的方法平行测定6份，结果盐酸水苏碱含量的平均值为1.05 mg/g（RSD=0.42%，n=6），结果表明，本法的重复性较好。
2.7 稳定性实验
取同一供试品溶液（批号131003）在室温下立即测定，放置4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h重新测定，结果峰面积测得值分别为1 567 089、1 598 012、
1 570 234、1 589 012、1 560 132、1 584 121、
1 562 131，平均值为1 575 189，RSD为0.86%，峰面积基本一致，表明样品溶液在24 h内稳定。
2.8 回收率实验
称取已知含量的慈航颗粒约10 g，共9份，精密称定，放置于50 mL量瓶中，加甲醇适量，另分别精密量取盐酸水苏碱对照品溶液（含量为0.202 mg/mL）10 mL、10 mL、10 mL、15 mL、15 mL、15 mL、20 mL、20 mL、20 mL，分别加入以上量瓶中，超声30 min，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，制成3个不同浓度的供试品溶液各3份；分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录峰面积。按外标法计算回收率分别为98.36%、99.03%、98.99%、98.87%、98.84%、97.53%、98.35%、97.55%、98.21%，平均回收率为98.37%，RSD为0.52%。
2.9 样品测定
精密称取盐酸水苏碱对照品适量，用甲醇溶解并稀释成约含盐酸水苏碱0.202 mg/mL的溶液，作为对照品溶液；另取慈航颗粒适量，捻碎混匀，精密称取10 g，放置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇，摇匀，超声30 min，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。取2种溶液各10μL，用外标法以主峰面积定量（见表1）。
3 讨论
3.1 溶剂的选择
盐酸水苏碱易溶于水和醇，因此采用甲醇溶解。
3.2 波长的选择
在500～190 nm波长范围进行扫描，结果显示，盐酸水苏碱对照品溶液在200 nm波长处有最大吸收，故本法选200 nm为紫外检测波长。
3.3 结论
本文建立的高效液相色谱法测定慈航颗粒中盐酸水苏碱的含量，结果较为准确，且简便、快速、专属性强、可靠。
参 考 文 献
[1]万斯斯，黄琳琅.益母草及其成方制剂中盐酸水苏碱含量测定方法[J].中国现代药物应用，2010（19）：107-108.
[2]康军.当归化学成分及其药理作用研究进展[J].中医中药，2005（23）：120.
[3]周江.川芎有效成分及其药理作用研究概况[J].浙江中医杂志，2007（10）：615-616.
[责任编辑：陈泽琦]
【作者简介】唐新，男，广西南寧人，广西康华药业有限责任公司执业药师，研究方向：新药的研究及推广；钟彩娜，女，广西南宁人，广西康华药业有限责任公司执业药师，研究方向：新药的研究及推广。