【摘 要】
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目的 构建梅花鹿骨髓组织cDNA文库.方法 采用TRIzol Reagent提取骨髓总RNA,mRNA Purification Kit纯化mRNA.反转录合成双链cDNA,末端补平,连接EcoR I并磷酸化,再用Xho I进行
【机 构】
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吉林大学公共卫生学院,吉林,长春,130021长春中医药大学中医药与生物工程研发中心,吉林,长春,130117;
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目的 构建梅花鹿骨髓组织cDNA文库.方法 采用TRIzol Reagent提取骨髓总RNA,mRNA Purification Kit纯化mRNA.反转录合成双链cDNA,末端补平,连接EcoR I并磷酸化,再用Xho I进行消化,柱层析分级分离去除短片断,连接载体pBluescript ⅡSK(+)并电转化至感受态细胞DH10B,测定文库的克隆数、重组率,PCR测定插入片断大小.结果 经鉴定,库容量达到3.5×10(6)克隆,重组率为94%,插入片段大小分布为0.5~4.5kb,平均长度约为1.5kb.结论 所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选梅花鹿已知和未知功能基因提供依据,为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础.
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