【摘 要】
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目的 克隆人血管生成抑制分子(METH1)全长cDNA,建立稳定表达人METH1分子的哺乳动物细胞系.方法RT-PCR获取人METH1 cDNA,序列测定后克隆人真核表达载体pCDNA3.0中,用脂质体转染入HepG2细胞,G418筛选出稳定表达细胞系,用RT-PCR与Western blot分别检测RNA和蛋白表达水平.结果RT-PCR扩增得到预期大小的目的条带,序列分析表明成熟肽编码区与发表序
【机 构】
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目的 克隆人血管生成抑制分子(METH1)全长cDNA,建立稳定表达人METH1分子的哺乳动物细胞系.方法RT-PCR获取人METH1 cDNA,序列测定后克隆人真核表达载体pCDNA3.0中,用脂质体转染入HepG2细胞,G418筛选出稳定表达细胞系,用RT-PCR与Western blot分别检测RNA和蛋白表达水平.结果RT-PCR扩增得到预期大小的目的条带,序列分析表明成熟肽编码区与发表序列[GI:5725505]完全一致;克隆人pCDNA3.0中得到METH1真核表达载体,G418筛选3周后得到稳定表达细胞系,RT-PCR与Western blot显示METH1在HepG2细胞中有高水平表达.结论人METH1全长cDNA成功克隆,并在哺乳动物细胞系HepG2中获得稳定表达,为进一步研究METH1分子对增生性瘢痕血管形成的作用奠定了理论基础。
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