目的 研究以肺炎球菌表面黏附素(PsaA)为蛋白载体的 b 型流感嗜血杆菌(Hib)多糖结合疫苗的制备及其免疫原性和免疫保护作用。方法用基因工程技术制备 PsaA 基因重组蛋白(rPsaA),通过酰胺缩合法与 Hib 多糖偶联结合,制成结合疫苗(Hib-PsaA)。用此疫苗免疫接种3周龄幼鼠,同时以破伤风类毒素和 B 型流感嗜血杆菌(Hib)多糖结合疫苗(Hib-TT)接种小鼠作为对照及磷酸盐缓冲液(PBS)接种作空白对照。末次免疫后2周观察小鼠对 Hib 多糖和 PsaA 蛋白的免疫原性应答;同时以肺炎球菌分别注入免疫后小鼠和未免疫的对照小鼠听泡,分别于攻击后第3天和第7天观察小鼠中耳内细菌清除率和中耳炎症反应情况,观察新型疫苗的免疫保护作用。结果以基因工程技术成功制备并纯化 rPsaA 蛋白,并运用酰胺缩合法与 Hib 多糖偶联结合,结合物的洗脱峰前移,证明偶联成功。接种该结合疫苗的小鼠产生的抗 PsaA 的抗体 IgG 几何平均滴度(GMT)为4525;抗 Hib 抗体 IgG 的 GMT 为1393。在接种 Hib-TT 疫苗的对照组中,小鼠产生的抗 Hib 抗体 GMT 为1493,两种疫苗的抗 Hib 抗体 GMT 差异无统计学意义,但是 Hib-PsaA 结合疫苗显示出对肺炎球菌的免疫应答,优于以破伤风类毒素为载体的结合疫苗。细菌攻击后第3天实验组小鼠中耳细菌清除率明显高于对照组,组织病理学检查实验组小鼠细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组,显示了 Hib-PsaA 结合疫苗针对肺炎球菌的有效免疫保护作用。结论运用基因工程技术可获得高纯度、高产量的 rPsaA 蛋白,以酰胺缩合法可成功将 rPsaA 蛋白与 Hib 多糖偶联结合,所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼小鼠体内可诱导针对 rPsaA 蛋白与 Hib 多糖的免疫应答反应,并且可有效预防肺炎球菌导致的急性中耳炎。提示该疫苗免疫可以在预防 Hib 感染性疾病的同时,对肺炎链球菌导致的急性中耳炎可能有一定的预防作用。
以重组肺炎球菌表面黏附素A为载体蛋白的流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的实验研究
【摘 要】
:
目的 研究以肺炎球菌表面黏附素(PsaA)为蛋白载体的 b 型流感嗜血杆菌(Hib)多糖结合疫苗的制备及其免疫原性和免疫保护作用。方法用基因工程技术制备 PsaA 基因重组蛋白(rPsaA),通过酰胺缩合法与 Hib 多糖偶联结合,制成结合疫苗(Hib-PsaA)。用此疫苗免疫接种3周龄幼鼠,同时以破伤风类毒素和 B 型流感嗜血杆菌(Hib)多糖结合疫苗(Hib-TT)接种小鼠作为对照及磷酸盐缓冲
【机 构】
:
复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科,上海200031,武汉生物制品研究所细菌疫苗研究室,复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科,上海200031,复旦大学附属公共卫生临床中心科研中心,武汉生物制品研究所细
【出 处】
:
中华微生物学和免疫学杂志
【发表日期】
:
2014年34期
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