【摘 要】
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目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒, 并检测其在NIH3T3细胞的表达情况.方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接, 构建同时含
【机 构】
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江苏大学医学技术学院免疫学与免疫检验学系
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目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒, 并检测其在NIH3T3细胞的表达情况.方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接, 构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒, 通过磷酸钙沉淀法共转染HEK 293细胞, 收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒, 并对病毒纯度和滴度进行鉴定.利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞, 体外观察感染效率和目的基因转录情况.结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3, 实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012 vg/mL, 体外感染NIH3T3细胞, 流式细胞术测定感染效率可达92.88%, 实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3 mRNA.结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV, 并可有效感染NIH3T3细胞, 为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具.
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