探讨不同浓度氟对体外培养的原代大鼠成釉细胞增殖、凋亡的影响。
方法分离出生4 d的SD大鼠上下颌磨牙牙胚成釉细胞进行原代培养。采用0.0（对照组）、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mmol/L氟化钠（NaF）作用24、48、72 h，倒置显微镜下观察细胞形态，免疫组织化学法鉴定成釉细胞，3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测各时间点细胞增殖情况。细胞经1.6 mmol/L NaF处理24、48 h或经50 μmol/L caspase泛抑制剂Z-VAD-FMK预处理1 h后给予1.6 mmol/L NaF处理48 h，流式细胞术检测细胞凋亡。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测caspase-3及多聚（ADP核糖）聚合酶（PARP）表达。采用统计软件SigmaStat V 3.5对数据进行统计学分析。
结果①细胞形态：成釉细胞密度较低时呈多角形，密度较大时呈铺路石样，细胞核明显，具有上皮来源细胞的典型形态特征。②免疫组织化学染色：培养的细胞细胞角蛋白14（CK14）和成釉蛋白（AMBN）表达呈阳性，符合成釉细胞细胞免疫学特征。③MTT检测：NaF对成釉细胞增殖效应呈剂量和时间依赖性。低浓度NaF（0.4、0.8 mmol/L）组经24 h处理，细胞增殖指数（1.38 ± 0.11、1.29 ± 0.13）均显著高于对照组（1.00 ± 0.00，P均< 0.05）；经48 h处理，各处理组间细胞增殖比较差异无统计学意义（对照组、0.4、0.8 mmol/L组增殖指数分别为1.00 ± 0.00、1.16 ± 0.14、0.94 ± 0.07，P均> 0.05）；经72 h处理，0.4、0.8 mmol/L组细胞增殖指数（0.87 ± 0.03、0.80 ± 0.04）均显著低于对照组（1.00 ± 0.00，P均< 0.05）。中等浓度（1.6 mmol/L）组经24 h处理，细胞增殖指数（0.90 ± 0.08）与对照组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；经48、72 h处理，细胞增殖指数（0.38 ± 0.03、0.26 ± 0.04）均低于对照组（P均< 0.01）。高浓度（3.2、6.4 mmol/L）组经24、48、72 h处理，细胞增殖指数（3.2 mmol/L：0.57 ± 0.14、0.08 ± 0.03、0.00 ± 0.00；6.4 mmol/L：0.11 ± 0.04、0.00 ± 0.00、0.00 ± 0.00）均显著低于对照组（P均< 0.01）。④流式细胞术检测细胞凋亡：1.6 mmol/L NaF处理细胞24、48 h，细胞凋亡率[（5.80 ± 2.03）%、（17.45 ± 4.97）%]均高于对照组[（2.59 ± 0.95）%，P均< 0.05]。caspase泛抑制剂Z-VAD-FMK预处理组细胞凋亡率[（9.43 ± 3.79）%]低于1.6 mmol/L NaF组[（18.26 ± 3.39）%，P < 0.05]。⑤Western blot检测：1.6 mmol/L NaF处理细胞48 h可引起caspase-3及PARP活化。
结论过量氟可抑制成釉细胞体外增殖，通过激活caspase级联反应引起细胞凋亡。