【摘 要】
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金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白,有β,α两个结构域.用另一个α结构域取代金属硫蛋白的β结构域,得到突变体αα.通过PCR法在αα-cDNA翻译起始密码子ATG前加入植物
【机 构】
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北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系,蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室,北京,100871
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金属硫蛋白是一类小分子量的金属结合蛋白,有β,α两个结构域.用另一个α结构域取代金属硫蛋白的β结构域,得到突变体αα.通过PCR法在αα-cDNA翻译起始密码子ATG前加入植物偏爱的碱基组合AACA,构建CaMV双35S启动子驱动的αα-cDNA植物表达载体pGPTVd35S-αα,此载体以抗除草剂基因(bar)作为选择标记物.用根癌农杆菌介导的叶盘法对栽培种烟草NC89进行转化.Southern和Western印迹分析表明突变体αα-cDNA已整合进入烟草基因组并且可以正常表达.Northern印迹结果显示突变体αα-cDNA在烟草根部的表达强于叶部.烟草根、茎、叶Cd2+含量分析表明,转基因植物与对照相比,Cd2+更多地集中在根部,在一定程度上降低了叶片中的Cd2+含量.Cd2+抗性实验进一步证明突变体αα-cDNA的表达提高了转基因烟草对Cd2+的抗性;转基因烟草在200μmol/LCdCl2条件下生长正常,在400μmol/CdCl2培养基内也可以存活.而100μmol/LCdCl2即成为对照烟草的致死剂量.
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