腺病毒介导的重组Tum5基因抑制视网膜新生血管的实验研究

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目的

观察腺病毒介导的重组Tum5基因(rAd-Tum5)对氧诱导视网膜病变(OIR)模型小鼠视网膜新生血管的抑制作用。

方法

7日龄C57BL/6J小鼠96只,随机分为正常组、OIR组、rAd-绿色荧光蛋白(GFP)空载体组(OIR rAd-GFP组)和重组Tum5基因组(OIR rAd-Tum5组),每组均为24只。参照文献方法建立OIR模型。12日龄时,OIR rAd-GFP组、OIR rAd-Tum5组小鼠双眼玻璃体腔分别注射病毒滴度为1×1011 pfu/ml的rAd-GFP、rAd-Tum5病毒1 μl。OIR组、正常组小鼠双眼玻璃体腔分别注射等体积无菌生理盐水。视网膜铺片观察视网膜无灌注区相对面积,病理切片计数突破内界膜的视网膜前细胞核数,免疫荧光法及蛋白免疫印迹法检测小鼠视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)表达情况。

结果

正常组、OIR组、OIR rAd-GFP组、OIR rAd-Tum5组小鼠视网膜无灌注区相对面积比较,差异有统计学意义(F=61.224,P<0.01)。组间视网膜无灌注区相对面积比较,OIR rAd-GFP组与OIR组差异无统计学意义(P=0.827);OIR rAd-Tum5组与OIR组、OIR rAd-GFP组差异均有统计学意义(P<0.01)。4组间突破内界膜的视网膜前细胞核数比较,差异有统计学意义(F=635.738,P<0.01)。组间突破内界膜的视网膜前细胞核数比较,OIR rAd-GFP组与OIR组差异无统计学意义(P=0.261);OIR rAd-Tum5组与OIR组、OIR rAd-GFP组差异有统计学意义(P<0.01)。与正常组小鼠视网膜VEGF表达比较,OIR组和OIR rAd-GFP组VEGF表达均上调,OIR rAd-Tum5组小鼠视网膜VEGF表达较OIR组和OIR rAd-GFP组呈下降趋势。

结论

重组rAd-Tum5基因可以抑制视网膜新生血管生成,可能与下调VEGF表达有关。

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