【摘 要】
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目的评价氢对氧糖剥夺-复氧复糖损伤大鼠海马神经保护作用机制与线粒体自噬的关系。方法出生24 h的健康SD大鼠，体外分离并原代培养海马神经元，以7×105个/孔的密度将神经元接种于预先用多聚赖氨酸包被过的6孔板中，采用随机数字表法分为5组(n＝30)：对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺-复氧复糖＋氢气组(OGD/R＋ H2组)、氧糖剥夺-复氧复糖＋3-甲基腺嘌呤(3-MA
【机 构】
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天津医科大学总医院麻醉科 天津市麻醉学研究所 300052(现在桂林医学院附属医院SICU工作),桂林医学院附属医院SICU 541001,桂林医学院附属医院SICU 541001,桂林医学院附属医院
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目的评价氢对氧糖剥夺-复氧复糖损伤大鼠海马神经保护作用机制与线粒体自噬的关系。
方法出生24 h的健康SD大鼠，体外分离并原代培养海马神经元，以7×105个/孔的密度将神经元接种于预先用多聚赖氨酸包被过的6孔板中，采用随机数字表法分为5组(n＝30)：对照组(C组)、氧糖剥夺-复氧复糖组(OGD/R组)、氧糖剥夺-复氧复糖＋氢气组(OGD/R＋ H2组)、氧糖剥夺-复氧复糖＋3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(OGD/R＋3-MA组)和氧糖剥夺-复氧复糖＋氢气＋3-MA组(OGD/R＋ H2＋3-MA组)。C组正常培养箱(75%N2-20%O2-5%CO2)中培养24 h；OGD/R组、OGD/R＋ H2组、OGD/R＋3-MA组和OGD/R＋ H2＋3-MA组制备神经元氧糖剥夺-复氧复糖损伤模型；OGD/R＋H2组造模后，置于富氢培养箱(60% H2-10%O2-5%CO2-25%N2)中培养24 h；OGD/R＋3-MA组造模后，加入自噬抑制剂3-MA 10 mmol/L，然后置于正常培养箱中培养24 h；OGD/R＋H2＋3-MA组造模后，加入3-MA 10 mmol/L，然后置于富氢培养箱中培养24 h。采用MTT法测定神经元存活率，DCFH-DA荧光探针法测定ROS活性，JC-10法测定线粒体膜电位(MPP)，流式细胞术测定神经元凋亡率，Western blot法测定微管相关蛋白1轻链3(LC3)、PTEN诱导激酶1(PINK1)和Parkin的表达水平，并计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。
结果与C组比较，OGD/R组及OGD/R＋H2组神经元存活率和细胞MMP降低，神经元凋亡率和ROS活性升高，PINK1和Parkin的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)；与OGD/R组比较，OGD/R＋H2组神经元存活率及MMP升高，神经元凋亡率和细胞ROS活性降低，PINK1和Parkin的表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高，OGD/R＋3-MA组神经元存活率及MMP降低，神经元凋亡率及细胞ROS活性升高，PINK1和Parkin的表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)。与OGD/R＋H2组比较，OGD/R＋3-MA组和OGD/R ＋H2＋3-MA组神经元存活率及MMP降低，神经元凋亡率及细胞ROS活性升高，PINK1和Parkin的表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)。
结论氢对氧糖剥夺-复氧复糖损伤大鼠海马神经保护作用机制与促进线粒体自噬有关。
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