【摘 要】
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为建立稳定表达流感病毒(Ⅳ) HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的Age Ⅰ和Not Ⅰ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放
【机 构】
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内蒙古农业大学,中国农业科学院上海兽医研究所
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为建立稳定表达流感病毒(Ⅳ) HA蛋白的MDCK细胞系,本研究利用含有嘌呤霉素抗性基因的pMX载体,在启动子下游的Age Ⅰ和Not Ⅰ两个限制性内切酶位点之间插入PR8株HA基因的开放阅读框,构建重组质粒pMX-PR8HA,将pMX-PR8HA与3个分别表达VSVG、gag/pol和NF-KB的重组质粒共转染293T细胞,获得逆转录病毒样颗粒.用含有逆转录病毒样颗粒的细胞培养上清液感染MDCK细胞,利用嘌呤霉素进行筛选、纯化得到稳定表达PR8株HA蛋白的细胞系.连续传10代后,进行PCR、RT-PCR、IFA和western blot鉴定,结果表明,获得了能够稳定表达Ⅳ PR8株HA蛋白的MDCK细胞系.该细胞系的建立有望为Ⅳ表达外源基因提供可靠的培养细胞系.
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