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目的
观察Zeste基因增强子同源物2(EZH2)选择性抑制剂GSK126对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响。
方法体外分离培养BMSCs，取第3代细胞进行实验。噻唑蓝(MTT)检测确定GSK126的最适浓度。将细胞消化、悬浮后，以5×106/ml的细胞密度进行高密度培养，用含有或不含GSK126的软骨诱导液诱导培养3周。免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖的表达。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖和性别决定区Y框蛋白9(SOX9) mRNA的表达。Western blot检测H3K27me3的蛋白含量。
结果5 μmol/L GSK126无明显细胞毒作用，被选为本实验最适浓度。组织学染色显示实验组微团中的细胞体积较对照组稍大，细胞密度稍低。两组微团均有Ⅱ型胶原、蛋白多糖的合成与分泌，且实验组的表达最为强烈，实验组Ⅱ型胶原吸光度(A)值为0.368 5±0.040 5，对照组A值为0.132 2±0.021 1。Real-time PCR检测显示，GSK126干预3周后实验组Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达量明显高于对照组(P<0.01)。Western blot检测显示对照组H3K27me3蛋白水平显著高于实验组，GSK126的干预使得H3K27me3含量明显降低，实验组A值为0.326 5±0.030 2，对照组A值为0.674 2±0.056 2。
结论GSK126通过降低细胞内H3K27me3蛋白水平，有效地促进BMSCs成软骨方向分化。