【摘 要】
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目的阐明鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)活化核转录因子NF-κB的机制.方法利用强力霉素Dox诱导表达LMP1的鼻咽癌细胞株Tet-on-LMP1-HNE2为实验模型,首先应用免疫
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目的阐明鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(LMP1)活化核转录因子NF-κB的机制.方法利用强力霉素Dox诱导表达LMP1的鼻咽癌细胞株Tet-on-LMP1-HNE2为实验模型,首先应用免疫印迹方法测定Dox诱导后不同时相LMP1的表达动力学以及IκBs蛋白量及功能的改变.进而用间接免疫荧光法检测NF-κB的亚细胞定位.最后采用瞬间共转染及报道基因活性分析分析NF-κB的活性.结果在鼻咽癌细胞Tet-on-LMP1-HNE2中,Dox处理15分钟后LMP1的表达迅速升高并维持与较高水平直至120分钟.LMP1的诱导性表达导致IκBα的磷酸化并降解,但IκBα蛋白总量无改变.继IκBα的磷酸化并降解,NF-κB(P65)自胞浆易位至胞核且活性升高.IκBα的显性负性突变子抑制NF-κB(P65)的核易位及报道活性.LMP1的诱导性表达并未引起IκBβ蛋白水平变化.结论在鼻咽癌细胞Tet-on-LMP1-HNE2中,EB病毒LMP1通过IκBα的磷酸化并降解激活核转录因子NF-κB的活性,并且,LMP1诱导的NF-κB 活性能被IκBα的显性负性突变子完全抑制.IκBβ在此信号传导途径中无改变.LMP1表达前后IκBα蛋白总量维持恒定可能是由于NF-κB的活化迅速启动了IκBα的重头合成这一自身调节环路所致.
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