目的构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA干扰慢病毒载体并在小鼠体内鉴定其抑制效果。方法参照OPN GenBank上的序列,对OPN基因沉默位点进行分析,设计针对OPN信使RNA的小发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)OPN-shRNA及阴性对照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,合成pSicoR-GFP-shRNA重组体。经鉴定序列无误后,与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91辅助质粒包装并转染293FT细胞,得到有效滴度为5×109 TU/mL的病毒原液。经尾静脉将构建的慢病毒载体注射入小鼠体内,qRT-PCR及Western blot检测小鼠肝脏OPN mRNA及蛋白的抑制效果。结果成功构建针对OPN的shRNA慢病毒载体,经纯化、浓缩得到滴度为5×109 TU/mL病毒原液。与正常对照组、阴性对照组相比,实验组OPN mRNA及蛋白表达水平明显下降;正常对照组、实验组OPN mRNA及蛋白表达水平无明显差别。结论利用RNA干扰技术,借助慢病毒载体,成功构建小鼠肝脏OPN基因低表达模型。为进一步研究OPN在胆石症等疾病中的作用提供了有力工具。