【摘 要】
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目的:研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6、E7蛋白与干扰素诱导蛋白IFI16的相互作用,初步揭示IFI16拮抗HPV16E6、E7致瘤活性的分子机制.方法:(1)体外GST阻滞
【机 构】
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山东大学医学院微生物学教研室,耶鲁大学医学院分子生物物理与分子生物化学系
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目的:研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6、E7蛋白与干扰素诱导蛋白IFI16的相互作用,初步揭示IFI16拮抗HPV16E6、E7致瘤活性的分子机制.方法:(1)体外GST阻滞分析:克隆、表达及纯化GST-HPV16E6和GST-HPV16E7融合蛋白,将含有IFI16蛋白的EB病毒阴性伯基特淋巴瘤(BJAB)细胞提取物与上述纯化蛋白孵育,通过Western B1otting分析蛋白质的体外相互作用;(2)免疫共沉淀分析:构建表达His-HPV16E6蛋白的真核表达载体,将表达有IFI16和HIs-HPV16E6蛋白的293T细胞裂解物与抗His抗体孵育,用IFI16抗体检测共沉淀蛋白复合物中IFI16蛋白的存在;将表达有IFI16和HPV16E7蛋白的CaSki和SiHa细胞裂解物与HPV16E7抗体孵育,检测共沉淀蛋白复合物中E7与IFI16是否结合.结果:成功构建了原核表达质粒pGEX4T/HPV16E6及pGEX-4T/HPV16E7,并表达、纯化获得GST-HPV16E6及GST-HPV16E7融合蛋白.体外GST阻滞分析结果表明,用IFI16单抗做Western B1otting分析可检测到复合物中IFI16蛋白,表明GST-HPV16E6和GST-HPV16E7均可与IFI16蛋白结合.免疫共沉淀分析进一步证实,共沉淀蛋白复合物中也可检测到IFI16蛋白,证明在细胞中HPV16E6和E7蛋白也能与IFI16蛋白结合.结论:无论在体外还是在细胞中,抑瘤因子IFI16蛋白均能特异性地结合HPV16 E6和E7蛋白.为进一步揭示IFI16拮抗HPV主要癌蛋白E6、E7的分子机制奠定了基础.
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