【摘 要】
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目的 利用杂交瘤技术筛选抗B型肉毒毒素(BoNT/B)的鼠源单克隆抗体(mAb).方法 以BoNT/BHc蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选阳性细胞株经有限
【机 构】
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哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨 150076;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100071;军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京,100071;哈尔滨商业大学药学院,哈尔滨,150
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目的 利用杂交瘤技术筛选抗B型肉毒毒素(BoNT/B)的鼠源单克隆抗体(mAb).方法 以BoNT/BHc蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选阳性细胞株经有限稀释法克隆化后,采用腹水诱生的方法制备抗体,通过亚型鉴定、SDS-PAGE、Western印迹以及非竞争ELISA等方法对抗体进行鉴定.结果 5只BALB/c小鼠免疫后尾血效价均达到1:64000,取其中效价最高的5号鼠制备杂交瘤,筛选到9株阳性细胞,经鉴定抗体重链有IgG1和IgG2b两种亚型,轻链均为κ型.腹水制备的1E9-H2抗体纯度>96％,以线性表位与抗原BoNT/BHc特异性结合,亲和力常数为6.7×10-9 mol/L.结论 筛选到1株高亲和力鼠源单克隆抗体,为BoNT/B中和抗体研发及检测方法建立提供了选择.
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