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目的
对一个遗传性乳光牙本质(dentinogenesis imperfecta shields type Ⅱ，DGI-Ⅱ)家系进行DSPP基因的突变分析。
方法采集家系成员外周血或胎儿绒毛组织，用酚氯仿法提取基因组DNA。应用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR)- Sanger测序方法鉴定先证者DSPP基因第2～5外显子及外显子/内含子衔接区序列，并进行突变分析；针对突变位点设计错配引物引入Alu Ⅰ酶切位点，通过限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳方法在该家系正常人及60名无关正常个体中进行致病突变验证；构建含微型DSPP基因的pcDNA3.1基因表达载体，在体外培养细胞中验证突变致病性。
结果该家系3例患者和一名胎儿均携带DSPP基因内c.52-1G>A的杂合突变，突变造成该基因第3外显子5′端剪接点变异；60名对照者和家系正常个体均未携带该突变；微小基因(Minigene)体外表达显示c.52-1G>A导致DSPP基因转录产物第3外显子的跳跃剪接。
结论本研究在一个DGI-Ⅱ家系中发现了DSPP基因内一个新的致病剪接突变(c.52-1G>A)，并在此基础上为先证者提供了产前基因诊断。