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目的 构建canstatin原核表达载体,表达重组人canstatin蛋白,并验证其生物学活性.方法利用BamHⅠ和HindⅢ从重组质粒pUCm-T/canstatin上切下canstatin基因,插入表达质粒pET-22b(+)相应位点,转化E.coli BL21.异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE电泳分析蛋白表达情况.超声破碎菌体,Ni-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白,PBS对其透析复性.鸡胚尿囊膜(CAM)实验验证目的蛋白抗血管生成活性.结果重组质粒pUCm-T/canstatin在BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,电泳证实切下目的基因canstatin cDNA,将其插入质粒pET-22b(+)相应位点,转化E.coli BL21后,琼脂板上生长出多个白色菌落.挑选7个白色菌落做BamHⅠ和HindⅢ双酶切,所有菌落均切出分别对应原质粒与目的基因的2条特异性条带,证实均为阳性克隆.IPTG诱导其中1个克隆表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明在相对分子质量24 000左右出现新的蛋白表达条带,诱导后1、2、3、4 h表达蛋白占菌体总蛋白百分比分别为18.2%、18.8%、23.0%和23.4%.Ni-NTA柱亲和层析后,在125、250 mmol/L洗脱液中纯化出目的蛋白.CAM实验显示重组人canstatin蛋白能抑制新生血管形成,且与剂量呈正相关.结论成功构建了canstatin原核表达载体,表达并纯化出有活性的重组人canstatin蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础。