目的 研究KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化(EMT)的调节作用.方法 构建LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体.将Capan-2细胞分为实验组(转染LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体)、阴性对照组(转染空载体)以及空白对照组1(含10％小牛血清的1640培养基)；而后再将实验组Capan-2细胞分为抑制剂组(转染化学合成的miR-100-5p抑制剂)、空载体对照组(转染无关序列micro-RNAs抑制剂)、空白对照组2(含10％小牛血清的1640培养基).用双酶切及测序鉴定慢病毒并计算病毒滴度.LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体稳定转染至Capan-2细胞后,观察细胞的形态学改变.应用实时定量PCR检测各组细胞中KAP-1、EMT标志蛋白以及miR-100-5pmRNA的表达情况.应用Western blot法检测各组细胞中KAP-1、EMT标志蛋白表达水平.计量资料采用(x)±s表示,组间比较均采用方差分析.结果 成功构建LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体,病毒滴度为2×108 TU/ml.慢病毒载体转染Capan-2细胞48 h后,实验组细胞与对照组比较其形态有明显间质样改变.实验组、阴性对照组、空白对照组1细胞中各目标蛋白mRNA的相对表达量:KAP-1分别为1.77±0.83、5.03 ±0.29、5.13±1.14,N-钙黏蛋白分别为2.62 ±0.71、5.07 ±1.53、5.81 ±1.49,波形蛋白分别为2.50 ±0.21、3.83±0.57、4.92±0.90,E-钙黏蛋白分别为7.20±1.17、7.83 ±0.78、3.07±0.36,miR-100-5p分别为1.81 ±0.40、7.01 ±0.96、6.87±0.35,3组比较,差异有统计学意义(F=5.99,7.62,7.88,6.62,4.64,P＜0.05).抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP-1 mRNA的相对表达量分别为1.56 ±0.42、4.89 ±0.61、5.20 ±0.38,3组比较,差异有统计学意义(F=5.14,P＜0.05)；波形蛋白mRNA的相对表达量分别为3.10±1.37、3.44 ±0.94、3.08±1.16,3组比较,差异无统计学意义(F=0.49,P＞0.05).Western blot检测结果表明:实验组、阴性对照组、空白对照组1细胞中各目标蛋白的相对表达量:KAP-1蛋白分别为2.77 ±1.99、0.83 ±0.46、0.71 ±0.26,N-钙黏蛋白分别为1.31 ±0.38、0.41 ±0.37、0.08 ±0.04,波形蛋白分别为4.25±0.63、1.03 ±0.33、1.37±0.92,E-钙黏蛋白分别为0.62 ±0.06、1.17 ±0.45、3.04±0.65,3组比较,差异有统计学意义(F=5.54,4.68,3.19,8.18,P＜0.05).抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP-1蛋白的相对表达量分别为2.27 ±0.71、0.56 ±0.43、0.61 ±0.39,3组比较,差异有统计学意义(F=4.81,P＜0.05)；波形蛋白分别为3.19±0.55、3.93±0.06、3.61 ±0.73,3组比较,差异无统计学意义(F =0.04,P＞0.05).结论 KAP-1转录因子通过特异性调控其下游miR-100-5p表达,从而促进人类胰腺癌细胞Capan-2 EMT。