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目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用。方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2M cAb、IL-4M cAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(b io-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认M cAb、b io-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率。结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2.0μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2M cAb、IL-4M cAb最适稀释度分别为1∶20和1∶40,b io-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10~15μg/m l和15μg/m l。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2+CD4+/IL-4+CD4+比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26。结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关。