【摘 要】
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为建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗中病毒含量的方法,根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列设计合成了标准品引物和定量引
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为建立快速、敏感、特异的评价猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗中病毒含量的方法,根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列设计合成了标准品引物和定量引物,RT-PCR扩增PRRSV基因片段并连接到pMD19-T载体上,构建标准品质粒pMD19-T-PRRSV。采用SYBR GreenⅠ染料法进行荧光定量PCR检测,分析标准曲线并进行特异性、稳定性、重复性试验。结果显示,该方法检测病毒含量为7.43×100~7.43×108拷贝/μL,标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值之间相关系数高(R2=0.9989),引物特异性强。应用该方法对6个厂家PRRS活疫苗中的病毒含量进行测定,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量差异较大,最高差异可达47.9倍。本试验建立的检测PRRS活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法可用于疫苗生产过程中及免疫动物前疫苗质量的评价。
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