目的构建血小板源性生长因子B(PDGF B)原核表达载体,表达足量的PDGF BB蛋白,作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,观察角膜内皮细胞增殖情况。方法从健康剖宫产妇胎盘组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT PCR),扩增出PDGF BcDNA,将其克隆至含T7启动子的质粒pET28a(+)中,构建表达质粒pET PDGF B,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL PDGF B,进行PDGF BB蛋白的表达,以Ni2+NTA树脂对表达蛋白纯化、复性;将得到的PDGF BB蛋白作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,用MTT法分析其对细胞增殖的影响;通过倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态变化以及细胞内部超微结构。结果经基因测序证明,成功构建出pET PDGF B质粒;凝胶自动扫描分析表明,PDGF BB在BL21(DE3)大肠杆菌中得到了高效表达,表达的PDGF B单体蛋白经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE),显示了1条特异蛋白带,相对分子质量约为27000;MTT法证明所表达的PDGF BB蛋白可促进体外培养的猫角膜内皮细胞增殖。结论pET PDGF B原核表达载体的成功构建和PDGF BB蛋白制备纯化为生产活性PDGF BB蛋白及其进一步功能研究奠定了基础。PDGF BB蛋白具有促进猫角膜内皮细胞增殖的作用。