【摘 要】
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目的 在前期工作已证实HBV基因中的250～453 nt为一个新的负性调控元件的基础上,探讨其对HBV X启动子(XP)启动作用的影响.方法 构建含250～453 nt的HBV X启动子驱动虫荧光素酶表
【机 构】
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重庆医科大学病毒性肝炎研究所、教育部感染性疾病分子生物学重点实验室
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目的 在前期工作已证实HBV基因中的250～453 nt为一个新的负性调控元件的基础上,探讨其对HBV X启动子(XP)启动作用的影响.方法 构建含250～453 nt的HBV X启动子驱动虫荧光素酶表达的质粒pNRE-XP,与表达海肾荧光素酶的质粒RL-TK共转染人肝癌HepG2细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶表达,RT PCR检测虫荧光素酶基因mRNA水平的表达,并与相应对照组进行比较.同时,在含HBV全基因组的质粒LJ196上通过缺失突变的方法除去250～453 nt片段,将其与反式提供C、P蛋白的质粒LJ96共转染HepG2细胞,RT PCR检测X基因mRNA表达,并与对照组比较.结果 该负性调控元件存在时,HepG2细胞中虫荧光素酶活性明显低于对照组;逆转录聚合酶链反应中虫荧光素酶基因mRNA表达也低于相应的对照组.在LJ196上突变掉250～453 nt后,X基因表达量高于对照组.结论 该负性调控元件可下调HBV XP的启动作用,在HBV基因组上缺失掉该片段后XP驱动下的基因表达增加.
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