【摘 要】
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目的：构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E0蛋白的MDBK细胞系，并探究其传代和冻存稳定性。方法：用实验室制备的BVDVE0基因重组慢病毒感染MDBK细胞，荧光观察并收集MDBK细胞培养上清
【机 构】
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南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所,南方医科大学检验与生物技术学院
【基金项目】
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广东省科技计划(2016A030303008)
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目的：构建分泌表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E0蛋白的MDBK细胞系，并探究其传代和冻存稳定性。方法：用实验室制备的BVDVE0基因重组慢病毒感染MDBK细胞，荧光观察并收集MDBK细胞培养上清进行Western印迹分析，通过qPCR方法检测重组细胞系中重组基因拷贝数变化。结果：IgK信号肽组和预测信号肽组均分泌表达E0蛋白；通过Oligo6.0软件设计BVDVE0基因SYBRGreenⅠ染料法荧光定量PCR检测引物，经过条件优化，未出现非特异性扩增，检测下线为20拷贝/μL；通过建立的荧光定量PCR和
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