线粒体是维持细胞稳态的重要细胞器，在决定细胞命运中起着至关重要的作用。该文旨在探讨延胡索乙素（levo-tetrahydropalmatine，THP）上调线粒体活性氧（mitochondrial reactive oxygen species，mtROS）对人肝癌细胞自噬流和能量代谢表型的影响。选用SMMC-7721和BEL-7402细胞株作为模型，经THP(100 μmol·L-1)和/或N-乙酰-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）(10 μmol·L-1)处理SMMC-7721和BEL-7402细胞24 h后，利用MitoSOX荧光探针采用流式细胞术检测mtROS变化水平，并同时通过荧光显微镜对mtROS可视化观察；利用CYTO-ID自噬荧光探针检测自噬流的变化情况，采用Western blot检测2种肝癌细胞中微管相关蛋白轻链3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）与磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）蛋白表达；Seahorse XFp检测细胞线粒体能量代谢变化趋势，通过实时无标记RTCA检测对肝癌细胞增殖的影响；Annexin V-FITC和PI/RNase染色流式细胞术检测细胞凋亡率，MitoTracker Red CMXRos荧光探针可视化观察线粒体膜电位变化。结果表明，与对照组相比，THP可促进SMMC-7721和BEL-7402肝癌细胞内mtROS产生，发现联合NAC后削弱了由THP单独引发的自噬或自噬流的增加。添加自噬抑制剂氯喹（chloroquine，CQ）发现，THP可进一步促进mtROS产生并增加凋亡率。进一步实验表明，THP可以抑制线粒体呼吸水平，导致线粒体基础呼吸、三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）产量及最大呼吸能力下降。同时，THP显著降低了肝癌细胞的增殖指数和线粒体膜电位，进而诱导细胞发生凋亡达到抑制细胞增殖的目的，而NAC则缓解这种细胞凋亡的产生。结果表明，THP上调mtROS水平可显著促进HCC细胞自噬，引发的自噬为保护性自噬，并通过重编程能量代谢表型进而抑制线粒体呼吸，激活线粒体凋亡途径而引发细胞凋亡。