应用白细胞cDNA文库的酵母双杂交技术筛选HCTP4结合蛋白基因

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目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与HCTP4蛋白结合的蛋白的编码基因。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCTP4基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DHS5α),提出质粒并测序,进行生物信息学分析。结果:成功克隆出HCTP4基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基及铺有X
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