【摘 要】
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本文旨在探讨Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma试剂盒提取血清标本中外泌体所需的最适血清量。采用Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma试剂盒分别对250、500、1 000μL血清中的外泌
【机 构】
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复旦大学附属公共卫生临床中心肝炎一科,复旦大学附属华山医院感染科
【基金项目】
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上海市科学技术委员会2014年度医学引导类科技项目(14411966200);上海市卫生和计划生育委员会2014年课题(20140042);上海申康医院发展中心临床科技创新项目(SHDC12017125)
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本文旨在探讨Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma试剂盒提取血清标本中外泌体所需的最适血清量。采用Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma试剂盒分别对250、500、1 000μL血清中的外泌体进行抽提,使用透射电子显微镜检测分离的外泌体大小和形态,蛋白质免疫印迹法检测外泌体蛋白标记CD63和TSG101的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测外泌体中微小RNA-122(microRNA-122,miR-122)的表达。结果显示,透射电子显微镜下可见血清外泌体呈圆形或椭圆形,直径30~150nm,有完整的膜结构。蛋白免疫印迹法检测外泌体CD63和TSG101阳性。实时荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者250、500、1 000μL血清外泌体中miR-122表达量,与正常人相比,分别上调22.44、21.48、20.69倍(P=0.42)。结果提示,在临床血清样本体积有限的情况下,采用Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma试剂盒提取血清中外泌体,减少血清量至250μL也可达到所需实验目的。
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