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摘要：目的：探究肺癌放射治疗时采用阿米福汀对机体正常细胞与肺癌细胞的影响。
方法：本次研究对象为体外培养仓鼠的V79细胞，将其接种在培养皿中，分别采用2～10Gy的γ射线进行照射处理，其中用药组照射半小时后将其暴露在1.2mmol/L阿米福汀中，同时评定V79细胞存活分数受到阿米福汀的影响；在无瘤小鼠（C57BL/6）的腹腔内注射200mg/kg的阿米福汀半小时后给予全身照射（8Gy），同时观察不同时间外周血白细胞数目变化情况；在荷Lewis肺癌小鼠（C57BL/6）的肿瘤上进行10Gy局部照射，之前半小时给予200mg/kg阿米福汀照射处理，同时对阿米福汀影响肿瘤放疗的效果进行评定。
结果：用药组V79细胞集落存活分数、无瘤小鼠外周血白细胞数降幅与单纯放射组有显著性差异（P<0.05），有统计学意义；用药组在荷Lewis肺癌小鼠体积上与单纯放射组并无显著性差异（P>0.05），无统计学意义。
结论：肺癌放射治疗时，阿米福汀对机体正常细胞有放射保护作用，而对肿瘤组织细胞则无放射保护作用。
关键词：肺癌放射治疗 阿米福汀 正常细胞 肺癌细胞 影响
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）10-0050-02
就近几年相关临床研究来看，肺癌综合治疗中放射治疗成为了不可分割的一个重要部分，放射治疗除了能抑制肿瘤生长，提高肿瘤局部控制率之外，还能延长患者的生存期，从而对晚期癌症手术患者也有一定的积极作用[1]。但是，中晚期癌症患者由于临近部位出现浸润与转移，就需要采取大野放射治疗，这样就会提高正常组织损伤可能性，比如说放射性肺炎、白细胞下降及放射性食管炎等[2]。为了尽量减少放射治疗对机体正常组织的损害，同时提高放射治疗的临床效果，相关学者孜孜不倦的探索与研究着，也发现了阿米福汀在肺癌放疗中对正常组织细胞可以起到一定的保护作用。为此，本文针对阿米福汀在放疗中对正常与肺癌细胞产生的影响展开了研究与探讨，现将结果作如下报告。
1 资料与方法
1.1 一般资料。
1.1.1 材料。本次研究选用的仓鼠V79细胞来自于复旦大学放射医学研究所，Lewis肺癌细胞来自于中科院上海细胞生物研究所，选用的C57BL/6小鼠全部为雄性，体重均为20.14±2.38g，周龄为6～9周，来自于中科院上海细胞生物研究所。
1.1.2 试剂与仪器。阿米福汀（大连美罗大药厂，国药准字H20010403，400mg/支）；射线仪器为Gamma Ⅱ40，产自加拿大，其照射量率为每分钟0.92Gy。
1.2 方法。本次研究方法分为四个部分，现介绍如下。
1.2.1 阿米福汀对V79细胞的放射保护：利用浓度为10%的新生牛血清RPMI1640培养液进行V79细胞培养，将指数生长期细胞接种在一次性塑料培养皿中（培养皿直径在60mm左右）[3]，其中每个培养皿中加入的培养液为4.5mL，此时将这些培养液分为用药组与单纯放射组，两组中根据照射剂量又分为了10个样本。用药组加入0.5mL的RPMI 1640培养液（含有2.31mg/mL的阿米福汀），目的是为了让其终浓度保持在1.2mmol/L，而单纯放射组同样加入前述培养液，但是其中不含有阿米福汀。当培养液加入半小时后分别采用2、4、6、8、10Gy进行照射，照射完成后将所有培养皿中的培养液吸出，同时采用Giemsa染色与甲醇固定处理，对培养皿中大于50集落数的细胞数进行计数。
1.2.2 阿米福汀保护小鼠造血系统：将本次研究中正常的C57BL/6小鼠随机均分为用药组与单纯放射组，每组10只，采用γ射线以8Gy进行全身照射。用药组在照射前半小时进行腹腔内注射0.5mL的8mg/mL的阿米福汀，而单纯放射组则注射等量盐水[4]，分别在两组照射前与照射后2、5、10及15天进行眼球后静脉丛取血，计数外周血白细胞。
1.2.3 Lewis肺癌细胞体外培养与荷瘤鼠模型制备：利用浓度为10%的新生牛血清RPMI1640培养液进行Lewis肺癌细胞的培养，最后制成细胞悬液（细胞含量在每毫升106个），将其从小鼠的右下肢皮下进行注射，用量为0.2mL，当瘤体直径长到1～1.5厘米后将荷瘤鼠处死，进而在无菌状态下将肿瘤组织剥离，再加用合理比例的生理盐水进行机械研磨，最终得到细胞悬液。每只小鼠的右下肢皮下注射细胞悬液，用量0.3mL，当小鼠右下肢肿瘤体积长到100～150mm3之后便可以用在实验中。
1.2.4 体Lewis肺癌照射中阿米福汀的作用：将荷瘤鼠随机分为用药组与单纯放射组，各自10只，用药组给予腹腔注射0.5mL的8mg/mL的阿米福汀，而单纯放射组则注射等量生理盐水。半小时后将两组荷瘤鼠固定在一个特制装置中，同时采用铅板将除了右下肢以外的部位屏蔽，采用照射仪器对右下肢肿瘤行局部照射处理。每隔两天对肿瘤最长径（定为a值）与最短径（定为b值）进行测量，其中肿瘤的体积计算公式为（V=ab2π/6），同时将肿瘤生长曲线绘制出来。
1.3 统计学分析。本次研究相关数据采用统计学软件SPSS17.0处理，用药组与单纯放射组对比采用t检验，结果以P<0.05为差异有统计学意义的标准。
2 结果
2.1 阿米福汀对V79细胞的放射保护作用。用药组的V79细胞的存活分数在加入阿米福汀后显示明显高于单纯放射组，差异性显著（P<0.05），有统计学意义，具体可见图1所示。
2.2 阿米福汀对小鼠血液系统的保护作用。在本次研究中，所有小鼠进行全身照射后，它们的外周血细胞数目都出现不同程度的降低，其中在照射后第五天降到最低后又开始回升，而在第十五天时用药组则恢复到正常范围。从不同时间点的外周血白细胞数目分析来看，用药组皆明显高于单纯放射组，并且单纯放射组恢复速度明显较慢，尤其是在照射后5、10、15天等处有着显著性差异（P<0.05），有统计学意义。详细结果可见图2所示。
2.3 阿米福汀影响照射后体Lewis肺癌的效果。两组荷瘤鼠肿瘤以10Gy进行局部照射后，时间延长肿瘤的体积也逐渐增大，其中观察期内20天中相同时间点之间并无统计学意义（P>0.05），揭示阿米福汀对肺癌无保护作用，详细结果可见图3。
3 讨论
放射治疗主要是利用电离作用产生活性自由基，从而让DNA结构发生改变，而内源性疏基及其离子则可以和自由基之间产生反应，若这种反应在DNA损伤固定之前就发生便能提高细胞的存活率[5]。但是，
放疗过程中一般会对临近正常组织细胞产生影响，故而需要采用放射保护剂进行处理，而近几年的研究发现阿米福汀当属该类保护剂中最为理想的一种。阿米福汀有着放射性损伤防护效果好、毒性小的优点，其能将放射线产生的自由基清除，同时提供DNA修复所需氢离子。从本次研究来看，将其应用在V79细胞、C57BL/6鼠细胞及癌细胞中，结果显示，其对正常组织细胞有一定的放射保护效果，而对于而对肿瘤组织细胞则无放射保护作用。因此，可以将其应用在肺癌放射治疗中，值得临床借鉴。
参考文献
[1] 任振义，白春学.阿米福汀在肺癌放射治疗时对机体正常细胞和肺癌细胞的影响[J].中国呼吸与危重监护杂志，2005，4（3）：181-184
[2] 李永强，周翔，张霆等.阿米福汀对肺癌放疗中不良反应的影响[J].现代肿瘤医学，2010，18（4）：708-711
[3] 任振义，白春学，金一尊等.阿米福汀在肺癌放射治疗时对机体细胞的影响[J].中华放射医学与防护杂志，2003，23（2）：95
[4] 章海珠，谢淑萍，陈建华等.肺癌患者应用氨磷汀配合放射治疗的观察与护理[J].护理与康复，2009，8（9）：802-803
[5] 夏广荣，刘桂梅，贺文等.多层螺旋CT灌注成像在肺癌放射治疗中的研究[J].中华放射医学与防护杂志，2011，31（5）：579-582
方法：本次研究对象为体外培养仓鼠的V79细胞，将其接种在培养皿中，分别采用2～10Gy的γ射线进行照射处理，其中用药组照射半小时后将其暴露在1.2mmol/L阿米福汀中，同时评定V79细胞存活分数受到阿米福汀的影响；在无瘤小鼠（C57BL/6）的腹腔内注射200mg/kg的阿米福汀半小时后给予全身照射（8Gy），同时观察不同时间外周血白细胞数目变化情况；在荷Lewis肺癌小鼠（C57BL/6）的肿瘤上进行10Gy局部照射，之前半小时给予200mg/kg阿米福汀照射处理，同时对阿米福汀影响肿瘤放疗的效果进行评定。
结果：用药组V79细胞集落存活分数、无瘤小鼠外周血白细胞数降幅与单纯放射组有显著性差异（P<0.05），有统计学意义；用药组在荷Lewis肺癌小鼠体积上与单纯放射组并无显著性差异（P>0.05），无统计学意义。
结论：肺癌放射治疗时，阿米福汀对机体正常细胞有放射保护作用，而对肿瘤组织细胞则无放射保护作用。
关键词：肺癌放射治疗 阿米福汀 正常细胞 肺癌细胞 影响
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2013）10-0050-02
就近几年相关临床研究来看，肺癌综合治疗中放射治疗成为了不可分割的一个重要部分，放射治疗除了能抑制肿瘤生长，提高肿瘤局部控制率之外，还能延长患者的生存期，从而对晚期癌症手术患者也有一定的积极作用[1]。但是，中晚期癌症患者由于临近部位出现浸润与转移，就需要采取大野放射治疗，这样就会提高正常组织损伤可能性，比如说放射性肺炎、白细胞下降及放射性食管炎等[2]。为了尽量减少放射治疗对机体正常组织的损害，同时提高放射治疗的临床效果，相关学者孜孜不倦的探索与研究着，也发现了阿米福汀在肺癌放疗中对正常组织细胞可以起到一定的保护作用。为此，本文针对阿米福汀在放疗中对正常与肺癌细胞产生的影响展开了研究与探讨，现将结果作如下报告。
1 资料与方法
1.1 一般资料。
1.1.1 材料。本次研究选用的仓鼠V79细胞来自于复旦大学放射医学研究所，Lewis肺癌细胞来自于中科院上海细胞生物研究所，选用的C57BL/6小鼠全部为雄性，体重均为20.14±2.38g，周龄为6～9周，来自于中科院上海细胞生物研究所。
1.1.2 试剂与仪器。阿米福汀（大连美罗大药厂，国药准字H20010403，400mg/支）；射线仪器为Gamma Ⅱ40，产自加拿大，其照射量率为每分钟0.92Gy。
1.2 方法。本次研究方法分为四个部分，现介绍如下。
1.2.1 阿米福汀对V79细胞的放射保护：利用浓度为10%的新生牛血清RPMI1640培养液进行V79细胞培养，将指数生长期细胞接种在一次性塑料培养皿中（培养皿直径在60mm左右）[3]，其中每个培养皿中加入的培养液为4.5mL，此时将这些培养液分为用药组与单纯放射组，两组中根据照射剂量又分为了10个样本。用药组加入0.5mL的RPMI 1640培养液（含有2.31mg/mL的阿米福汀），目的是为了让其终浓度保持在1.2mmol/L，而单纯放射组同样加入前述培养液，但是其中不含有阿米福汀。当培养液加入半小时后分别采用2、4、6、8、10Gy进行照射，照射完成后将所有培养皿中的培养液吸出，同时采用Giemsa染色与甲醇固定处理，对培养皿中大于50集落数的细胞数进行计数。
1.2.2 阿米福汀保护小鼠造血系统：将本次研究中正常的C57BL/6小鼠随机均分为用药组与单纯放射组，每组10只，采用γ射线以8Gy进行全身照射。用药组在照射前半小时进行腹腔内注射0.5mL的8mg/mL的阿米福汀，而单纯放射组则注射等量盐水[4]，分别在两组照射前与照射后2、5、10及15天进行眼球后静脉丛取血，计数外周血白细胞。
1.2.3 Lewis肺癌细胞体外培养与荷瘤鼠模型制备：利用浓度为10%的新生牛血清RPMI1640培养液进行Lewis肺癌细胞的培养，最后制成细胞悬液（细胞含量在每毫升106个），将其从小鼠的右下肢皮下进行注射，用量为0.2mL，当瘤体直径长到1～1.5厘米后将荷瘤鼠处死，进而在无菌状态下将肿瘤组织剥离，再加用合理比例的生理盐水进行机械研磨，最终得到细胞悬液。每只小鼠的右下肢皮下注射细胞悬液，用量0.3mL，当小鼠右下肢肿瘤体积长到100～150mm3之后便可以用在实验中。
1.2.4 体Lewis肺癌照射中阿米福汀的作用：将荷瘤鼠随机分为用药组与单纯放射组，各自10只，用药组给予腹腔注射0.5mL的8mg/mL的阿米福汀，而单纯放射组则注射等量生理盐水。半小时后将两组荷瘤鼠固定在一个特制装置中，同时采用铅板将除了右下肢以外的部位屏蔽，采用照射仪器对右下肢肿瘤行局部照射处理。每隔两天对肿瘤最长径（定为a值）与最短径（定为b值）进行测量，其中肿瘤的体积计算公式为（V=ab2π/6），同时将肿瘤生长曲线绘制出来。
1.3 统计学分析。本次研究相关数据采用统计学软件SPSS17.0处理，用药组与单纯放射组对比采用t检验，结果以P<0.05为差异有统计学意义的标准。
2 结果
2.1 阿米福汀对V79细胞的放射保护作用。用药组的V79细胞的存活分数在加入阿米福汀后显示明显高于单纯放射组，差异性显著（P<0.05），有统计学意义，具体可见图1所示。
2.2 阿米福汀对小鼠血液系统的保护作用。在本次研究中，所有小鼠进行全身照射后，它们的外周血细胞数目都出现不同程度的降低，其中在照射后第五天降到最低后又开始回升，而在第十五天时用药组则恢复到正常范围。从不同时间点的外周血白细胞数目分析来看，用药组皆明显高于单纯放射组，并且单纯放射组恢复速度明显较慢，尤其是在照射后5、10、15天等处有着显著性差异（P<0.05），有统计学意义。详细结果可见图2所示。
2.3 阿米福汀影响照射后体Lewis肺癌的效果。两组荷瘤鼠肿瘤以10Gy进行局部照射后，时间延长肿瘤的体积也逐渐增大，其中观察期内20天中相同时间点之间并无统计学意义（P>0.05），揭示阿米福汀对肺癌无保护作用，详细结果可见图3。
3 讨论
放射治疗主要是利用电离作用产生活性自由基，从而让DNA结构发生改变，而内源性疏基及其离子则可以和自由基之间产生反应，若这种反应在DNA损伤固定之前就发生便能提高细胞的存活率[5]。但是，
放疗过程中一般会对临近正常组织细胞产生影响，故而需要采用放射保护剂进行处理，而近几年的研究发现阿米福汀当属该类保护剂中最为理想的一种。阿米福汀有着放射性损伤防护效果好、毒性小的优点，其能将放射线产生的自由基清除，同时提供DNA修复所需氢离子。从本次研究来看，将其应用在V79细胞、C57BL/6鼠细胞及癌细胞中，结果显示，其对正常组织细胞有一定的放射保护效果，而对于而对肿瘤组织细胞则无放射保护作用。因此，可以将其应用在肺癌放射治疗中，值得临床借鉴。
参考文献
[1] 任振义，白春学.阿米福汀在肺癌放射治疗时对机体正常细胞和肺癌细胞的影响[J].中国呼吸与危重监护杂志，2005，4（3）：181-184
[2] 李永强，周翔，张霆等.阿米福汀对肺癌放疗中不良反应的影响[J].现代肿瘤医学，2010，18（4）：708-711
[3] 任振义，白春学，金一尊等.阿米福汀在肺癌放射治疗时对机体细胞的影响[J].中华放射医学与防护杂志，2003，23（2）：95
[4] 章海珠，谢淑萍，陈建华等.肺癌患者应用氨磷汀配合放射治疗的观察与护理[J].护理与康复，2009，8（9）：802-803
[5] 夏广荣，刘桂梅，贺文等.多层螺旋CT灌注成像在肺癌放射治疗中的研究[J].中华放射医学与防护杂志，2011，31（5）：579-582