【摘 要】
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目的 探讨短链脂肪酸丁酸对宫颈癌细胞增殖的影响及作用机制。方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞系，5 mmol/L丁酸处理细胞48 h后，采用MTT实验检测细胞增殖能力；电镜下观察细胞自噬体形成；采用mRFP-GFP-LC3双荧光染色检测细胞自噬流；分别采用Western blot法、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测自噬相关微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p62蛋白和mRNA的表达；采
【机 构】
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杭州市五云山医院（杭州市健康促进研究院）
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目的 探讨短链脂肪酸丁酸对宫颈癌细胞增殖的影响及作用机制。方法 体外培养人宫颈癌Hela细胞系，5 mmol/L丁酸处理细胞48 h后，采用MTT实验检测细胞增殖能力；电镜下观察细胞自噬体形成；采用mRFP-GFP-LC3双荧光染色检测细胞自噬流；分别采用Western blot法、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测自噬相关微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p62蛋白和mRNA的表达；采用流式细胞术检测线粒体活性氧水平。结果 MTT实验结果表明丁酸显著抑制宫颈癌细胞的增殖。电镜下观察到丁酸处理后的宫颈癌细胞中形成大量的双层膜结构自噬体，其中可见线粒体等细胞器。mRFP-GFP-LC3双荧光实验结果显示丁酸处理的细胞绿色荧光减少，红色荧光增强，表明丁酸增高自噬流水平。Western blot分析发现LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化随丁酸处理时间增加而增多，p62的表达则随丁酸处理时间增加而减少。RT-qPCR分析也在基因层面验证了丁酸上调LC3、下调p62基因表达。使用3-甲基腺嘌呤则会显著抑制丁酸诱导的LC3-Ⅱ活化。流式细胞术检测发现丁酸促进了线粒体内活性氧的积累。结论 短链脂肪酸丁酸通过自噬抑制宫颈癌细胞的增殖，线粒体ROS可能是重要的触发机制。
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