猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic DiarrhcaVirus,PEDv)是冠状病毒属的成员之一,会引起哺乳仔猪急性发作严重的腹泻和呕吐,从而导致其大批死亡PEDv最初发现于欧洲,现今已传播到亚洲其在美国的首次出现时间为2013年5月,并且至2013年7月中旬,15个州确定存在PEDv因此,美国急需快速、高通量的诊断检测方法,以进行血清学监测和监视.我们旨在设计可供诊断室使用的PEDv的ELISA 则定分析方法,以检测猪血清、口液和粪便中PEDv抗体研究人员已完成了美国多个PEDv分离株的病毒颗粒(N)和纤突蛋白(spike protein)1区(S1)和2区(S2)的测序,发现它们的同源性在99％以上因此,任意分离株的重组蛋白都可以代表美国的PEDv分离株,且在酶联免疫吸附测定中应该能产生交叉反应.为了净化PEDv蛋白,笔者设计了PCR引物,以扩增N、S1和S2随后,扩增的基因克隆到pET-25b和pMAL-p5X载体中,以进行细菌表达两种载体将用于提高获得大量高纯度蛋白质的可能性6X-his标签用于金属亲合蛋白(pET-25b)的纯化,而麦芽糖结合蛋白融合通过淀粉色谱分析法用于蛋白质纯化(pMAL-p5 X)纯合蛋白一旦获得,将要开发的直接ELISA法用于检测猪血清中PEDv抗体血清检测中获得最佳ELISA结果的蛋白或蛋白融合物将进一步优化,以用于粪便和口液样本中病毒抗体的检测.