【摘 要】
:
目的观察TGF-β3基因转染滇南小耳猪BMSCs后目的基因的表达和向软骨细胞分化的作用。方法以血清5型重组腺病毒(recombinant adenovirus 5,rAd5)构建系统为基因载体,包装为重
【基金项目】
:
云南省医学学科带头人培养基金资助项目(D-201207);云南省自然科学基金资助项目(2010FB);高等学校博士学科点专项科研基金联合资助项目(20115317110001)~~
论文部分内容阅读
目的观察TGF-β3基因转染滇南小耳猪BMSCs后目的基因的表达和向软骨细胞分化的作用。方法以血清5型重组腺病毒(recombinant adenovirus 5,rAd5)构建系统为基因载体,包装为重组腺病毒rAd5-TGF-β3,行双酶切及PCR鉴定。采集2月龄滇南小耳猪(体重12~15 kg)骨髓分离培养制备BMSCs,取第2代细胞用于实验。将实验分为3组,实验组和对照组分别用rAd5-TGF-β3、人腺病毒阴性空病毒载体转染BMSCs,以未转染的BMSCs为空白对照组。流式细胞仪检测转染效率,免疫荧光染色、Western blot检测各组TGF-β3蛋白表达情况;培养后各时间点倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot检测各组Ⅱ型胶原蛋白表达情况。结果 rAd5-TGF-β3重组腺病毒成功构建并转染BMSCs,在细胞内表达并迅速扩增,免疫荧光显微镜下可观察到强绿色荧光。流式细胞仪检测示转染72 h时病毒达最佳转染效果(转染效率为84.86%)。免疫荧光染色示,rAd5-TGF-β3转染BMSCs 72 h,细胞质内有明显TGF-β3蛋白表达;转染后7、21 d Western blot检测示,实验组在相对分子质量为30×103处有TGF-β3阳性条带,而对照组和空白对照组均呈阴性。转染后体外培养,倒置相差显微镜下示实验组向软骨细胞分化明显。培养21 d时Western blot检测示,实验组在相对分子质量为130×103处有Ⅱ型胶原阳性条带,对照组和空白对照组均呈阴性。结论重组腺病毒rAd5-TGF-β3可成功转染BMSCs,TGF-β3蛋白可稳定表达,并促使BMSCs向软骨细胞方向分化,为软骨缺损修复的局部基因治疗奠定了实验基础。
其他文献
<正> 一位出色的专业技术人员的薪酬可以与公司科技部部长的薪酬平起平坐;一位最优秀员工甚至可以拿到副总级的高薪,这样一种全新的薪酬分配模式——“宽带薪酬”
今年来,我国不论是科技、经济还是文化水平,都在飞速的发展,随着世界经济一体化的加快,中国各个领域也加快走出国门融入世界,在竞争如此激烈的国际环境中,我国只有不断的提高
<正> 为了更好地建立符合国际惯例,适合我国国情,并且与计划经济与市场调节相结合的新型经济运行机制相适应的现代税收制度。我国现代税收理论研究的任务之一,是实现传统治税
疾病预防控制机构要明确专人负责学校卫生工作,为学校提供疾病防制、食品卫生、健康教育等技术支持,协助学校落实各项卫生措施,完善食物中毒和传染病流行等突发事件的应急处
听、说、读、写是对外汉语教学中主要的教学内容.从语言作为交际工具的角度来看,说的培养显得更为重要.产生于20世纪70年代的以语言功能项目为纲,有针对性地培养学生的交际能
目的评价犬脱细胞肌腱片(decellularized tendon slices,DTSs)对兔肩袖损伤腱-骨愈合的作用。方法取成年比格犬跟腱经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备DTSs,体外对DTSs行组
余热锅炉的热膨胀及内保温结构对保温安装工艺提出了一定的要求,在余热锅炉的运行中,经常发生炉膛外壁的超温现象,特别是靠近锅炉结构梁/柱的超温,对锅炉支撑结构的强度会产
目的观察依达拉奉联合丹参川芎嗪治疗急性脑梗死的临床疗效及安全性。方法将128例急性脑梗死患者随机分成2组,观察组64例给予依达拉奉联合丹参川芎嗪治疗,对照组64例给予依达
<正> 从中国西北部到中亚、西南亚、直到北非的马格里布,在这一广大地区的许多国家或民族中,流行着一种古典音乐“马卡姆”,有的学者称之为“马卡姆”音乐现象。这些“马卡姆
目的:探讨传统扁桃体剥离术与高频电刀电凝扁桃体切除术的疗效。方法:选取2014年7月~2016年7月在医院接受治疗的72例扁桃体切除患者作为此次研究对象,并将其随机分为观察组与