探讨支气管哮喘(简称哮喘)患者血清和正常血清对内皮穿越模型中单核细胞向树突状细胞(DC)分化和功能的作用及其机制。
方法在江苏省哮喘联盟数据库中选择2008年5月至2009年5月轻～中度哮喘患者12例，募集匹配的健康志愿者12名，常规分离血清和外周血单个核细胞，免疫磁珠法获得单核细胞。选择健康产妇5名，胰酶消化法获得人脐静脉内皮细胞(第2代)，培养融合至内皮细胞单层。在内皮细胞上方加入单核细胞及哮喘血清(哮喘组)或正常血清(对照组)，构建内皮穿越模型。硝酸银染色法观察单核细胞来源的树突状细胞(MDDC)迁移行为。于48 h收集MDDC，扫描电镜观察形态学特征，电泳迁移率实验检测核因子κB(NF－κB)活性，流式细胞术、ELISA和混合淋巴细胞反应分别检测其表型和功能。
结果(1)在内皮穿越模型中，单核细胞2 h后发生正向穿越，48 h后发生逆向穿越并分化为DC。(2)与穿越前单核细胞[CD14(81±6)%、人白细胞抗原DR(HLA－DR)(24±5)%、CD80(2.8±2.0)%、CD86(14±4)%、CD83(0.9±0.8)%]比较，对照组MDDC的CD14[(20±5)%]显著下降(F＝49.01，P<0.05)、HLA－DR、CD80、CD86和CD83 [(43±4)%、(17.9±3.5)%、(43±11)%和(6.7±1.8)%]均显著增高(均P<0.05)，但CD83仍较低，为未成熟DC。(3)与对照组比较，哮喘组MDDC的HLA－DR和CD86 [(55±6)%和(59±12)%]相仿(F值分别为15.29和35.97，均P>0.05)、CD80和CD83[(49.7±10.2)%和(30.2±6.8)%]显著增高(F值分别为34.01和20.68，均P<0.05)，为成熟DC。并且，哮喘组MDDC呈典型的树枝样突起，其NF－κB活性、白细胞介素－12 p70水平和T细胞增殖作用[(100±11)%、(568±43)ng/L和(2033±198)cpm]较对照组[(12±3)%、(220±35)ng/L和(952±64)cpm]显著增高(均P<0.05)。
结论哮喘血清可诱导内皮穿越模型中单核细胞向DC异常分化成熟，并与NF－κB过度激活有关。该模型为剖析哮喘免疫学发病机制和筛选新型抗哮喘药物建立了新的体外实验平台。