【摘 要】
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目的探讨以乳腺癌特异抗原BA46基因转导树突状细胞(DC)治疗乳腺癌的可行性. 方法取健康人外周血,采用密度梯度离心的方法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),以AIM-V培养基于6
【机 构】
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广州南方医科大学附属南方医院肿瘤科,广州南方医科大学附属南方医院呼吸科,美国阿肯色大学医学院基因治疗中心
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目的探讨以乳腺癌特异抗原BA46基因转导树突状细胞(DC)治疗乳腺癌的可行性. 方法取健康人外周血,采用密度梯度离心的方法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞),以AIM-V培养基于6孔板培养,贴壁5 h,轻轻洗去悬浮细胞(T细胞,冻存备用),取贴壁细胞,将细胞分为基因转染组及对照组,基因转染组感染携带BA46基因的重组腺相关病毒rAAV/BA46/Neo,对照组以293细胞冻融液刺激,两组细胞均采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC前体细胞成熟.第7天,收集悬浮细胞(DC),显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析DC的表面标志CD80、CD86、CD40的表达情况;另取该DC与T细胞按1∶20比例混合,含5%人血清蛋白的AIM-V为培养基,同时加入IL-2与GM-CSF,共育7 d,诱导获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL),取BA46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T为靶细胞,采用51Cr释放法测量杀伤效率,同时以流式细胞仪检测CTL群体中CD8/CD4和CD8/CD56的比值. 结果 BA46基因转导的DC表面标志CD80、CD86、CD40的表达均明显高于对照组DC,所激活的T细胞对BA46阳性的乳腺癌细胞株Hs578T有很好的杀伤效果,此杀伤具有抗原特异性和MHC限制性,且该T细胞中CD8/CD4和CD8/CD56的比值均明显高于对照组(细胞裂解物冲击DC所激活的T细胞). 结论 BA46基因转染成功制备DC,并诱导特异的CTL,为乳腺癌的DC基因转染疗法打下基础.
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