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目的
探讨在角质形成细胞无血清培养基条件下，用人成纤维细胞、角质形成细胞和黑素细胞接种于人去表皮真皮构建组织工程皮肤。
方法胰酶和胶原酶消化处理健康小儿包皮，获得表皮和真皮细胞悬液。分别将角质形成细胞、黑素细胞传至第3代，成纤维细胞传至第5代，调整细胞密度为2.5 × 105/ml。制备人去表皮真皮（含部分基底膜成分），先将成纤维细胞悬液种于6孔板板底，24 h后将人去表皮真皮放入6孔板，角质形成细胞、黑素细胞悬液接种于人去表皮真皮表面（成纤维细胞、角质形成细胞、黑素细胞比例为1∶4∶1。实验组用角质形成细胞无血清培养基培养,对照组用含10% FBS的DMEM、K-SFM、M254，3种培养液比例为1∶ 1∶1的混合培养基培养，人去表皮真皮作为空白对照。液下培养3 d后，空气液面培养相结合的方式进行培养，每3天换液1次，2周后取培养的组织工程皮肤分别行HE染色，Melan-A、S-100、HMB45、CKpan、P63、K5、K6、K14、Ki67、Vimentin、Collagen Ⅳ、Laminin免疫组化染色及PAS染色并取正常皮肤做阳性对照。
结果经过14 d的气液培养，实验组出现完整的新生表皮结构, CKpan、P63、K5、K6、K14、Ki67、Melan-A、S-100、HMB45、Collagen Ⅳ、Laminin免疫组化染色阳性；对照组出现完整的新生表皮结构,可见角质层, CKpan、P63、K5/6、K14、Ki67、Laminin免疫组化染色阳性。
结论角质形成细胞、黑素细胞及成纤维细胞与人去表皮真皮在角质形成细胞无血清培养基条件下，体外可构建组织工程皮肤。