【摘 要】
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目的 探讨微重力环境对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRTL-5)微小RNA(miRNA)表达的影响.方法 体外培养FRTL-5,随机分为模拟微重力(SMG)组和正常重力(NG)组,每组3个样本.SMG组采用
【机 构】
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100101北京,安徽医科大学解放军306临床学院病理科100101北京,解放军306医院普通外科;100101北京,解放军306医院呼吸内科;100101北京,解放军306医院放射科;100101北
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目的 探讨微重力环境对大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRTL-5)微小RNA(miRNA)表达的影响.方法 体外培养FRTL-5,随机分为模拟微重力(SMG)组和正常重力(NG)组,每组3个样本.SMG组采用旋转细胞培养系统(RCCS)模拟微重力环境,NG组于培养箱静置培养,24h后提取样本总RNA,进行荧光标记和芯片杂交.采用Feature Extraction软件处理杂交图像提取原始数据,应用Genespring软件进行分位数标准化和后续处理,筛选差异表达显著的miRNA,反转录实时定量PCR(RT-qPCR)验证芯片结果准确性.通过miRNA靶基因预测数据库TargetScan和microRNAorg对差异miRNA进行靶基因预测,以其交集作为潜在调节靶基因,对预测靶基因分别进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,判定差异miRNA主控的生物学过程和信号通路.结果 miRNA芯片检测发现,FRTL-5在模拟微重力环境下与正常重力环境下差异表达的miRNA有81个,其中53个显著上调,28个显著下调,差异表达最显著的3条,包括显著下调的rno-let-7b-3p、rno-miR-346(P＜0.05),以及显著上调的rno-miR-494-3p(P＜0.05),对其芯片结果进行RT-qPCR验证,结果相一致.GO分析显示,差异表达的miRNA与细胞老化、凋亡、对低氧的反应、转录等生物学过程相关;KEGG分析显示,差异表达的miRNA与低氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、环磷酸鸟苷-蛋白激酶G(cGMP-PKG)信号通路、叉头框转录因子O(FoxO)信号通路及多种甲状腺激素调节通路相关.结论 微重力环境下大鼠甲状腺滤泡上皮细胞相关miRNA表达发生显著变化,基于芯片技术的miRNA靶基因预测和功能富集分析可为甲状腺失重应激反应、损伤及修复措施的探讨提供理论参考.
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