探讨c-Met抑制剂AMG-102对喉鳞癌细胞的增殖抑制和放射增敏作用。
方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AMG-102对喉鳞癌细胞株Hep-2和KBV200的增殖抑制作用。采用克隆形成实验分析AMG-102对Hep-2和KBV200细胞的放射增敏作用。采用流式细胞术检测Hep-2和KBV200细胞的凋亡情况。采用Western blot法检测细胞中c-Met/p-Met、凋亡蛋白cleaved caspase 3及下游信号通路蛋白Akt/p-Akt和Erk/p-Erk的表达。利用RNA干扰技术下调细胞中c-Met表达，转染c-Met过表达质粒使细胞中c-Met过表达，分析Hep-2和KBV200细胞对AMG-102的敏感性变化。
结果与KBV200细胞比较，Hep-2细胞对AMG-102更加敏感，半数抑制浓度(IC50)分别为14和9 μmol/L。Hep-2细胞中c-Met和p-Met蛋白的相对表达量分别为194.48±0.57和177.76±1.53，均明显高于KBV200细胞(分别为171.24±1.00和115.37±0.56，均P<0.001)。AMG-102作用于肝细胞生长因子(HGF)处理后的KBV200细胞，可使其p-Met蛋白的相对表达水平明显降低(P<0.001)。与二甲基亚砜(DMSO)组比较，AMG-102联合照射可明显增加Hep-2细胞的放射敏感性(SER＝1.28，P<0.001)；而AMG-102对KBV200细胞的放射敏感性影响很小(SER＝1.18，P＝0.002)。与4 Gy照射组和5 μmol/L AMG-102处理组比较，4 Gy照射＋5 μmol/L AMG-102处理组Hep-2细胞的凋亡率明显增加，cleaved caspase-3蛋白的表达水平明显升高。而各处理组KBV200细胞的凋亡率和cleaved caspase-3蛋白的表达水平无明显变化。与DMSO处理组比较，4 Gy照射组、5 μmol/L AMG-102处理组和4 Gy照射＋5 μmol/L AMG-102处理组Hep-2细胞中p-Met、p-Akt和p-Erk蛋白的表达水平下降，其中4 Gy照射＋5 μmol/L AMG-102处理组中p-Met、p-Akt和p-Erk蛋白的表达水平比4 Gy照射组和5 μmol/L AMG-102处理组更低。但在KBV200细胞中，各处理组的p-Met、p-Akt和p-Erk蛋白表达水平均未明显降低。照射前及照射后30 min、1 h、4 h、8 h、24 h Hep-2细胞中p-Met蛋白的相对表达水平分别为99.89±0.61、138.62±1.00、163.07±5.00、87.80±1.85、90.67±0.65和94.09±1.41，照射后30 min和1 h，p-Met蛋白表达水平有所增加(均P<0.001)，但照射后4～24 h，p-Met蛋白表达水平明显下降(均P<0.05)，而KBV200细胞中p-Met蛋白的表达水平不随照射时间的变化而变化(P>0.05)。干扰c-Met蛋白表达后，Hep-2细胞对AMG-102的敏感性下降，而KBV200细胞对AMG-102的敏感性无明显变化(P>0.05)。进一步检测显示，与siRNA阴性对照组比较，c-Met-siRNA组Hep-2细胞的放射敏感性呈增加趋势(SER＝1.07，P＝0.068)。质粒诱导c-Met过表达后的两种细胞经10 μmol/L AMG-102处理，KBV200细胞的增殖率为(60.05±3.23)%，明显低于空白对照组和siRNA阴性对照组[分别为(90.08±1.04)%和(90.12±1.01)%，P<0.001]，提示过表达c-Met蛋白后，KBV200细胞对AMG-102的敏感性升高，而Hep-2细胞对AMG-102的敏感性下降。进一步检测显示，c-Met过表达的KBV200细胞的放射敏感性呈下降趋势(SER＝0.7，P＝0.005)。
结论c-Met抑制剂AMG-102对c-Met过表达的喉鳞癌细胞的增殖抑制作用明显、放射增敏作用强，表明具有c-Met过表达的喉鳞癌应用抗c-Met受体的分子靶向治疗更有效。