直接获得差异表达基因全长cDNA的改良消减杂交方法

来源 :山东大学学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：junar

【摘要】

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目的:探索一种可以直接克隆差异表达基因全长cDNA的方法.方法:结合Clontech公司的"SMART PCR"cDNA合成技术和Promega公司的生物素-磁珠亲和技术,以鼻咽癌耐药细胞系CNE2/DDP

【作者】

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姜润德张立新岳文李春海王占民

【机构】

：

山东大学齐鲁医院普通外科,军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物学实验室

【出处】

：

山东大学学报(医学版)

【发表日期】

：

2005年4期

【关键词】

：

消减杂交基因多药耐药鼻咽肿瘤 Subtractive hybridization Genes Multidrug resistance Nasophary

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目的:探索一种可以直接克隆差异表达基因全长cDNA的方法.方法:结合Clontech公司的"SMART PCR"cDNA合成技术和Promega公司的生物素-磁珠亲和技术,以鼻咽癌耐药细胞系CNE2/DDP及其亲代细胞CNE2为研究对象,采用一种基于PCR技术的改良消减杂交方法筛选并克隆耐药相关基因.点杂交鉴定排除假阳性,对部分差异表达片段测序并进行序列分析,RT-PCR对差异表达的基因片段做进一步验证.结果:用此方法建立了可以克隆差异表达基因cDNA全长的双向消减文库.经过对部分差异

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