【摘 要】
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目的研究帕金森氏病相关蛋白PINK1在线粒体外膜上定位的具体机制。方法以体外培养的HEK293T细胞转染表达不同蛋白的真核表达质粒,然后加入DMSO作为对照或者加入线粒体解偶联
【机 构】
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四川大学华西第二医院发育与干细胞研究所; 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室;
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目的研究帕金森氏病相关蛋白PINK1在线粒体外膜上定位的具体机制。方法以体外培养的HEK293T细胞转染表达不同蛋白的真核表达质粒,然后加入DMSO作为对照或者加入线粒体解偶联剂CCCP,以Western印迹和免疫共沉淀技术来检测蛋白的表达和相互作用的变化。结果全长的PINK1在CCCP作用下和线粒体上的Tom40的相互作用能力是DMSO对照的20倍以上,而去掉线粒体定位序列(MTS)和跨膜序列(TM)的PINK1以及其它线粒体外膜蛋白在CCCP作用下没有这样的相互作用。当CCCP去掉后,PINK1全长和Tom40的相互作用迅速减弱。去掉或突变掉TM序列的PINK1和Tom40不论在CCCP是否存在的情况下,均有相互作用。结论在受损线粒体外膜积累的PINK1只是卡在外膜蛋白转运通道上,并没有真正转运到外膜上。而当线粒体的跨膜电位恢复时,它会继续向内转运。
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