【摘 要】
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目的 研究白藜芦醇（RES）参与糖皮质激素诱导的成骨细胞线粒体自噬的作用机制。方法 体外培养人成骨细胞hFob1.19，地塞米松（DEX）诱导细胞线粒体自噬，使用不同浓度的RES （10-8～10-6 mol/L）处理成骨细胞5～120 min,CCK-8法检测成骨细胞的增殖，透射电镜检测成骨细胞内的自噬小体，酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测成骨细胞内
【基金项目】
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国家自然科学基金（81971322）；
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目的 研究白藜芦醇（RES）参与糖皮质激素诱导的成骨细胞线粒体自噬的作用机制。方法 体外培养人成骨细胞hFob1.19，地塞米松（DEX）诱导细胞线粒体自噬，使用不同浓度的RES （10-8～10-6 mol/L）处理成骨细胞5～120 min,CCK-8法检测成骨细胞的增殖，透射电镜检测成骨细胞内的自噬小体，酶联免疫吸附实验、实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测成骨细胞内碱性磷酸酶（ALP）、caspase 3、转录沉默信息调节因子1 （SIRT1）、细胞自噬标志蛋白（LC3和Beclin1）和细胞线粒体自噬标志蛋白（TOM20和Hsp60）的活性表达。结果 DEX和RES作用成骨细胞2 h后，RES可明显减弱DEX对细胞增殖的抑制作用（P ＜0.05）；透射电镜显示，DEX+RES组自噬小体明显少于DEX组（P ＜0.05）; DEX可明显抑制成骨细胞内ALP活性，而RES明显改善了DEX对ALP蛋白活性的抑制作用（P ＜0.05）; RES可导致成骨细胞内caspase 3的蛋白活性明显降低（P ＜0.05）; RES以剂量依赖性和时间依赖性的方式增强成骨细胞中SIRT1的活性表达；RES单独作用成骨细胞，可显著抑制LC3和Beclin1 mRNA表达（P ＜0.05），并降低细胞内TOM20 （线粒体自噬标记蛋白）和Hsp60 （线粒体基质自噬标记蛋白）的蛋白活性；RES可部分抑制DEX对成骨细胞线粒体自噬的激活效应。结论 RES通过上调SIRT1而增强成骨细胞的增殖活性，并抑制DEX诱导的成骨细胞线粒体自噬的发生。
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