【摘 要】
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目的构建表达可溶性程序性死亡受体1(sPD1)溶瘤腺病毒并研究其对B16/F10细胞增殖凋亡影响及机制。方法构建表达sPD1溶瘤腺病毒并感染B16/F10细胞株，荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对比分析病毒复制功能，噻唑蓝(MTT)法检测重组病毒抑制B16/F10生长；注射病毒于B16/F10皮下瘤小鼠模型中，观察肿瘤体积变化，EliSpot技术检测肿瘤浸润淋巴细胞数量。结果病毒处理B16/F1
【机 构】
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450003 郑州，河南省人民医院 河南省肝胆胰腺疾病医学重点实验室,450003 郑州，河南省人民医院 干细胞研究中心,450003 郑州，河南省人民医院 干细胞研究中心,450003 郑州，河南省
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目的构建表达可溶性程序性死亡受体1(sPD1)溶瘤腺病毒并研究其对B16/F10细胞增殖凋亡影响及机制。
方法构建表达sPD1溶瘤腺病毒并感染B16/F10细胞株，荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对比分析病毒复制功能，噻唑蓝(MTT)法检测重组病毒抑制B16/F10生长；注射病毒于B16/F10皮下瘤小鼠模型中，观察肿瘤体积变化，EliSpot技术检测肿瘤浸润淋巴细胞数量。
结果病毒处理B16/F10细胞6、24、36、48、60、72 h后，Ad5处理组病毒拷贝数增加倍数分别是0.99±0.10、1.12±0.05、1.57±0.15、3.59±1.03、6.26±0.74、9.69±1.46；Ad5-sPD1处理组病毒拷贝增加倍数分别是1.00±0.104、0.99±0.08、1.05±0.03、3.56±1.04、6.04±0.38、11.05±1.12，两组比较差异无统计学意义(P＝0.754)；分别使用不同病毒量，感染复数(MOI)为0、5、10、15、20的病毒处理B16/F10细胞72 h后，Ad5处理组细胞活力为(100.00±6.39)%、(101.60±5.21)%、(98.66±7.31)%、(93.50±4.54)%、(73.16±2.45)%；Ad5-sPD1处理组细胞活力为(100.00±6.38)%、(97.10±6.37)%、(96.96±7.44)%、(95.67±7.46)%、(74.49±4.14)%，两组比较差异无统计学意义(P＝0.779)；Mock(无病毒感染)、Ad5和Ad5-sPD1病毒治疗B16/F10皮下瘤小鼠模型，实验终止时，肿瘤体积分别是(3 638±1.823)、(2 603±336)、(1 097±532) cm3，差异有统计学意义(Mock和Ad5：P＝0.044，Mock和Ad5-sPD1：P＝0.000，Ad5和Ad5-sPD1：P＝0.000)。Mock、Ad5和Ad5-sPD1病毒分别注射小鼠模型，5 d后，γ-干扰素(IFN-γ)斑点数分别是19.4±7.75、149.8±25.18、314±32.34，各组间差异有统计学意义(Mock和Ad5：P＝0.000，Mock和Ad5-sPD1：P＝0.000，Ad5和Ad5-sPD-1：P＝0.000)。
结论表达sPD1溶瘤腺病毒通过阻断免疫抑制通路，增加肿瘤特异性淋巴细胞浸润，提高溶瘤腺病毒的抗肿瘤作用，抑制肿瘤生长。
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