利用Caco-2细胞建立体外肠黏膜屏障模型，系统评价并初步探讨其在炎症损伤后黏膜通透性改变中的应用。
方法体外培养Caco-2细胞，接种于Transwell板上，每日观察细胞形态；自培养第5天起，隔日测细胞膜的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance，TEER)；对于TEER值达标准的孔测定荧光黄透过率，进行透射电镜的完整性验证。应用培养21 d的Caco-2细胞屏障，加入不同浓度(0、50、100、200 nmol/L)的血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)孵育24 h，光镜、电镜观察形态学改变，检测TEER和荧光黄透过率，应用间接免疫荧光和Western blot观察ZO-1蛋白的分布及表达。
结果Caco-2细胞单层TEER从第5～15天逐渐增加，在第15天已经达到600 Ω·cm2，平台期保持至第21天；在此期间，细胞形成紧密单层，电镜下细胞呈高分化，细胞间形成紧密连接，绒毛整齐，极性形成；荧光黄透过量极低，体外肠上皮细胞屏障形成。加入PAF后，以100 nmol/L对黏膜屏障通透性影响最大：电镜下见紧密连接结构破坏、断裂，细胞表面微绒毛脱落、稀疏；免疫荧光可见紧密连接的标志蛋白ZO-1荧光信号减弱，ZO-1环断裂，胞浆内可见阳性染色，提示其向膜下转移。此时，TEER值下降，荧光黄透过量明显增加，与对照组比较差异有统计学意义(P< 0.01)，与形态学改变规律一致；ZO-1蛋白表达亦降至最低，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。
结论经形态学及细胞通透性验证，培养2～3周的Caco-2细胞可形成肠屏障模型，用于体外肠黏膜屏障的研究；PAF影响紧密连接相关蛋白的表达，破坏紧密连接结构，从而影响肠黏膜屏障通透性。