【摘 要】
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目的:克隆、表达和纯化欧蓍草花粉主要过敏原Par j1。方法:根据Parj1.0102在GenBank中的序列号获得其核苷酸和氨基酸序列,确定开放阅读框,采用DNAstar软件优化密码子,合成全
【机 构】
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广州医学院第二附属医院呼吸疾病国家重点实验室变态反庆研究室过敏反应与临床免疫重点研究室,华南师范大学生命科学学院
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目的:克隆、表达和纯化欧蓍草花粉主要过敏原Par j1。方法:根据Parj1.0102在GenBank中的序列号获得其核苷酸和氨基酸序列,确定开放阅读框,采用DNAstar软件优化密码子,合成全基因,并克隆到表达载体pET-44a中,转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化蛋白表达条件并进行亲和层析纯化和Western blot鉴定。结果:PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pET-44a+/Par j1.0102原核表达质粒。对表达菌表达条件进行优化,最终确定在30℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导4小时时蛋白表达量最高,重组蛋白经亲和层析纯化,SDS-PAGE分析纯化产物在23 kD处有明显的条带。Western blot表明重组蛋白具有与StrepII标签抗体结合活性。结论:国内首次获得融合StrepII标签的Par j1.0102重组蛋白,为欧蓍草花粉过敏诊断及特异性免疫治疗奠定基础。
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