【摘 要】
：
目的探讨通过支持接触共培养模式，小鼠前庭支持细胞体外诱导人羊水干细胞向功能性神经元分化的可行性。方法分离培养人来源的羊水干细胞。从新生C57BL/6J小鼠获取内耳前庭组织，经酶解消化、细胞培养，选取其空心球体，制备单细胞饲养层。将标记慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白nGFP的羊水干细胞种植在饲养层表面，形成支持接触共培养，期间不添加任何外源性神经生长因子及神经元信号诱导因子。检测分化后的羊水干细胞中
【机 构】
：
广州医科大学附属第二医院耳鼻咽喉科，广州 510260；中山大学附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科 中山大学耳鼻咽喉科学研究所，广州 510080,海南省人民医院耳鼻咽喉医院，海口 570311,
论文部分内容阅读
目的探讨通过支持接触共培养模式，小鼠前庭支持细胞体外诱导人羊水干细胞向功能性神经元分化的可行性。
方法分离培养人来源的羊水干细胞。从新生C57BL/6J小鼠获取内耳前庭组织，经酶解消化、细胞培养，选取其空心球体，制备单细胞饲养层。将标记慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白nGFP的羊水干细胞种植在饲养层表面，形成支持接触共培养，期间不添加任何外源性神经生长因子及神经元信号诱导因子。检测分化后的羊水干细胞中神经元标记物β微管蛋白（β-Tubulin，Tuj1）、突触后致密蛋白PSD95的表达；标记功能性突触小泡技术（FM1-43穿透）检测分化后细胞是否具有神经元离子通道。同时观察羊水干细胞单独分化、小鼠前庭支持细胞单独分化、Transwell共培养体系中羊水干细胞和饲养层细胞神经元的分化情况。
结果单细胞饲养层表达内耳支持细胞特异性标记物细胞周期蛋白激酶抑制因子P27kip1。nGFP标记过的羊水干细胞接种于饲养层后，nGFP表达阳性的部位有（52.0±3.0）%的细胞表达Tuj1，并具有典型的神经元形态特征，突起长度平均（110.7±6.2） μm。饲养层细胞单独分化，仅有（1.1±0.6）%的细胞表达Tuj1阳性且形态典型的神经元；羊水干细胞单独分化，（92.0±1.0）%的细胞表达神经元标记物Tuj1，但无典型的神经元形态特征，突起长度平均（16.0±4.1） μm。将羊水干细胞与饲养层在Transwell中共培养，虽然（92.0±1.0）%的羊水干细胞表达Tuj1，但仍无典型的神经元形态特征，突起长度平均（17.0±4.5）μm，饲养层仅有（1.2±0.9）%的细胞Tuj1表达阳性且具有典型的神经元形态。
结论通过支持接触共培养模式，由小鼠前庭来源的内耳支持细胞制备的饲养层，可成功将人羊水干细胞定向诱导分化为功能性神经元。
其他文献
目的研究并探讨胸部低剂量CT(LDCT)应用于人群肺亚实性结节的筛查情况及人工智能的应用价值。方法回顾性分析山西省潞安区2015年1月至2017年12月间常规体检行LDCT筛查人群的临床资料，分析统计该地区筛查人群的特征、肺部亚实性结节的检出情况以及检出亚实性结节的独立预测因素，并评价人工智能阅片方法的准确性。结果该地区人群三轮筛查显示肺亚实性结节检出率分别为0.42%、0.69%和0.92%。完
目的分析非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCABG)术后肝素残留利弊，探讨OPCABG术中鱼精蛋白和肝素的最佳中和比。方法连续性纳入2018年7月至2019年1月112例行择期OPCABG患者，所有患者在手术当日入手术室前和术后返回ICU时检测普通血栓弹力图(TEG)、肝素酶纠正的血栓弹力图(hmTEG)，同时检测活化凝血时间(ACT)等常规凝血指标。根据术后普通TEG、hmTEG、术后1h、2
在肾脏集合管，血管加压素（arginine vasopressin，AVP）通过AVP-血管加压素受体2（vasopressin type 2 receptor，V2R）-环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）-水通道蛋白2（aquaporin2，AQP2）调控通路引起AQP2表达改变，实现对肾集合管水通透性的调节，参与人体水电解质的调节机制改变。膜迷
耳鸣严重影响患者的生活质量，目前认为其产生机制与听觉通路信号改变所引起的神经元可塑性变化有关，其中可能涉及神经元兴奋性和抑制性传导失衡。A型γ-氨基丁酸受体（γ-aminobutyric acid a receptor,GABAAR）和N-甲基-D天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）是重要的神经元抑制性和兴奋性受体，NMDAR功能亢进和GA
本文对2例分别就诊于浙江省金华市中心医院和武汉大学人民医院的SMARCB1（INI-1）缺陷型鼻腔鼻窦癌[SMARCB1（INI-1）-deficient sinonasal carcinoma，SDSC]病例进行回顾性分析，探讨其临床特征、组织病理学形态及免疫表型、诊断及鉴别诊断、治疗及随访情况。本研究提示SDSC是一种罕见的高侵袭性恶性肿瘤，组织形态谱广，但具有特征性基因学改变，熟悉这些特点有
目的探索利用骨导耳机振子、激振器输出振动直接刺激颅骨记录眼肌前庭诱发肌源性电位（bone conducted ocular vestibular evoked myogenic potential, BC-oVEMP)，为BC-oVEMP的临床应用提供最理想的振动刺激参数；比较骨导振动刺激和气导声刺激引出电位波形的参数差异。方法2017年3—5月，选取空军军医大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科招募的
目的对完整与分段取材法解剖小鼠耳蜗基底膜进行比较。方法2019年2—3月，将6只10周龄C57BL/6小鼠以随机数字表法分成2组，分别应用完整取材法及分段取材法进行基底膜取材。应用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽荧光染色方法标记耳蜗毛细胞并进行计数，观察基底膜的完整性以及荧光染色效果。SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果两种方法均能完整或分段将基底膜完全剥离，完整取材法耗时明显短于分段取材法，差
目的分析三种眼位状态下眼性前庭诱发肌源性电位（ocular vestibular evoked myogenic potential,oVEMP）的波形特征，探讨oVEMP检测的适宜眼位。方法研究对象为2017年12月至2018年5月行oVEMP检查的15例（30耳）眩晕患者（患者组），其中男7例、女8例，平均年龄（51±13）岁；另外选择22名（44耳）健康青年人作为对照组，其中男10名、女12
目的对两个耳聋家系进行遗传性耳聋基因突变检测，为家系遗传咨询与产前诊断提供参考。方法2018年3—12月，郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心应用二代测序技术对两个家系患儿进行耳聋基因检测（包含168个已知致病基因，包括核基因、相关线粒体区域及miRNA），并对可疑基因在患儿及家系成员中进行Sanger双向测序验证，确定致病突变后，对两个家系的高危胎儿进行产前诊断。结果家系1患儿检测到TMPRS
近年来，人类乳头状病毒（human papillomavirus，HPV）感染与口咽鳞状细胞癌（oropharyngeal squamous cell carcinomas，OPSCCs）发病率的关联性已得到证实。最新发布的美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）第8版癌症分期手册中建议将HPV的表达情况作为OPSCCs分级分期的重要指标