【摘 要】
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目的 建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺.方法 采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase(R)核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8h),优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件.采用两步层析法,探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)和上样缓冲液盐离子浓度(150、500、1000 mmol/L)对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)对
【机 构】
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长春生物制品研究所有限责任公司,吉林长春130012
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目的 建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺.方法 采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase(R)核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8h),优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件.采用两步层析法,探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)和上样缓冲液盐离子浓度(150、500、1000 mmol/L)对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)对离子层析介质纯化效果的影响.根据确定的参数进行3批次纯化工艺样品的检测.结果 病毒浓缩液经10 U/mL Benzonase(R)核酸酶37℃酶解6h后,DNA去除率即可达99％以上.确定复合介质的流速为60 cm/h,上样缓冲液组成为150 mmol/L NaCl+ 50 mmol/LTris,pH7.4,确定离子交换介质流速为150 cm/h.3批纯化工艺样品去除了99.94％的宿主细胞残留蛋白和99.99％的残留DNA,残留DNA达欧盟标准,不高于10 ng/剂.结论 初步建立了无血清悬浮MDCK细胞流感疫苗的下游纯化工艺.
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